מיקרוסקופ זמן-lapse מיקרופלואידית לחקר התמדה אנטיביוטית בחיידקים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 5:02 דק׳ • October 30th, 2025
התחל עם תאי חיידקים הגדלים באופן אקספוננציאלי המבטאים חלבון היתוך קושר DNA בעל תווית פלואורסצנטית כדי לדמיין את הנוקלואיד.
הוסף את התאים לכניסות התאים של צלחת מיקרופלואידית שהוכנה מראש.
לאחר מכן, הכנס מדיה המכילה אנטיביוטיקה ומדיה נטולת אנטיביוטיקה לכניסות תמיסה נפרדות.
אטום את הצלחת, הרכיב אותה על שלב המיקרוסקופ והתחל הדמיית זמן-lapse.
ראשית, טען את התאים לתא התרבית.
לאחר מכן, החדירו מדיה נטולת אנטיביוטיקה לתוך החדר כדי לתמוך בצמיחת תאים אקספוננציאלית.
לבסוף, הציגו את החומר המכיל אנטיביוטיקה.
האנטיביוטיקה גורמת לשבירת DNA דו-גדילית, והורגת תאים רגישים. תאים אלה מציגים נוקלואידים דחוסים שאינם משתכפלים עם פלואורסצנטיות יציבה.
חזור למדיה נטולת אנטיביוטיקה כדי לקדם החלמה.
תאים מתמידים - תת-אוכלוסייה קטנה ששורדת טיפול אנטיביוטי - מחדשים את שכפול ה- DNA, מתארכים ומתחלקים.
התאוששות זו מובילה לפלואורסצנטיות מוגברת בתאים מתמידים, ומאפשרת להבחין ביניהם לבין תאים רגישים.
הסר את תמיסת השימור מכל באר של הצלחת המיקרופלואידית, והחלף אותה במדיום תרבית טרי. אטום את הצלחת המיקרופלואידית עם מערכת הסעפת על ידי לחיצה על כפתור האיטום או דרך התוכנה המיקרופלואידית.
לאחר מכן, בממשק התוכנה המיקרופלואידית, בצע רצף תחול ראשון על ידי לחיצה על הפעל רצף תחול נוזלי. דגרו את הצלחת בארון מבוקר תרמוסטטי של המיקרוסקופ בטמפרטורה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים