טכניקה להכנת תרבית חיידקים חד שבטית

התחל בתרבית חיידקים, ובצע דילול סדרתי כדי להפחית את צפיפות התאים.

קח מנה קטנה של הדילול הסופי והנח אותה על צלחת אגר.

הוסף חרוזי זכוכית סטריליים ונער בעדינות את הצלחת כדי להבטיח הפרדה מרחבית של התאים, החיונית להשגת מושבות מבודדות היטב.

הסר את חרוזי הזכוכית, ואז הפוך את הצלחת ודגירה.

תאים בודדים מתרבים ויוצרים מושבות נפרדות, ויוצרים תרבית חד-שבטית שבה כל מושבה מורכבת מאוכלוסיית חיידקים אחידה מבחינה גנטית.

בחר מושבות בודדות והעביר אותן לצינורות נפרדים המכילים מדיום נוזלי.

דגרו את הצינורות בתסיסה. לאחר הדגירה, העריכו את העכירות של כל תרבות.

תאי חיידקים התלויים במדיום מפזרים אור, מה שגורם לתרביות להיראות עכורות יותר עם הגדלת צפיפות התאים.

בחר את הצינור עם העכירות הגבוהה ביותר, המציינת את אוכלוסיית החיידקים החד-שבטיים הצפופה ביותר, עבור יישומים במורד הזרם.

סמן את שלושת הבקבוקים שהוכנו עם 100 מיליליטר מרק LB Lennox עם מספר אחד, מספר שתיים ומספר שלוש.

פיפטה 0.1 מיליליטר מתרבית החיידקים שנוצרה לבקבוק הראשון. מכסים את הבקבוק ומניפים אותו ביד למשך דקה אחת לקבלת תמיסה הומוגנית. לאחר מכן, פיפטה 0.1 מיליליטר מבקבוק מספר אחד לבקבוק מספר שתיים. שוב, מכסים את הבקבוק ומניפים אותו ביד למשך דקה אחת. בצע את הדילול האחרון על ידי פיפטינג של 0.1 מיליליטר מבקבוק מספר שתיים לבקבוק מספר שלוש. יש לסגור את הבקבוק ולנער אותו ביד למשך דקה אחת.

ואז פיפטה 20 מיקרוליטר מהתמיסה על כל אחת מארבע צלחות הפטרי. לאחר מכן, הניחו ארבעה חרוזי זכוכית בקוטר שלושה מילימטר בכל אחת מצלחות הפטרי. סוגרים את מכסי כלי הפטרי ומנערים אותם ביד למשך דקה.

בסיום, הופכים את צלחות הפטרי ומדגרים את הצלחות באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.

בעזרת מרית נירוסטה, בחר את החיידקים החד-שבטיים שנוצרו מארבע צלחות הפטרי והכניס אותם לשבעת הצינורות הנותרים המכילים 12.5 מיליליטר מרק LB לנוקס. השאירו את הצינורות בחממה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות, ואז בחרו את זה עם פיזור האור הגדול ביותר בשיטה הקולורימטרית החזותית.