אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:52 דק׳ • October 30th, 2025
התחל בחיסון תרחיף של חיידקים מפחיתי מתכת למדיום תרבית עם יוני מתכת.
דגירה עם סיבוב כדי לקדם צמיחה ולהקל על ספיגת יוני מתכת.
יוני המתכת מתפזרים לתאים ומצטמצמים אנזימטית לתחמוצות מתכת בלתי מסיסות.
תחמוצות אלו מופרשות ומתגרענות ליד קרום החיידקים, שם הן מתאספות בעצמן למיקרו-קפסולות תחמוצת מתכת קשיחות מחוץ לתאים.
לאחר הדגירה, אולטרסאונד את ההשעיה כדי לנתק את החיידקים מהמיקרו-קפסולות.
צנטריפוגה את התערובת כדי לגלול את המיקרו-קפסולות הצפופות ולהשליך את הסופרנטנט.
שוטפים את הגלולה במים, ואז אולטרסאונד. שוב צנטריפוגה כדי להפריד את החיידקים מהמיקרו-קפסולות.
לאחר מכן, הוסף אתנול כדי להפחית את מתח הפנים.
אולטרסאונד שוב כדי לעקור את כל החיידקים שנותרו ולפזר את המיקרו-קפסולות.
שוב צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט.
חזור על שטיפת האתנול.
לבסוף, אטמו את הצינורות כדי למנוע ייבוש ועיוות של המיקרו-קפסולות המטוהרות.
אחזר את התרבית המכילה את החיידקים החד-שבטיים והוסף 50 מיקרוליטר ממנה לכל אחד מעשרת צינורות הצנטריפוגה של 50 מיליליטר המכילים את הנתרן טונגסטאט.
דגרו את עשרת הצינורות באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך 120 שעות. לאחר הדגירה, הניחו כל אחד מהצינורות באולטרסאונד ועשו סוניקטור לתאים ב-20 קילו-הרץ עם 150 וואט למשך שעה.
צנטריפוגה את הצינורות ואז הסר את הנוזל הצלול בעזרת פיפטה.
לאחר מכן, הוסיפו מים ואז סוניקציה וצנטריפוגה של הצינורות פעם נוספת.
לאחר הצנטריפוגה השנייה, הסר את הנוזל הצלול בצינורות בעזרת פיפטה.
לאחר מכן הוסף 35 מיליליטר של 99.8% אתנול ואולטרסאונד שוב את הדגימות.
שטפו את המינרלים על ידי צנטריפוגה, הוספת אלכוהול וסוניקציה של הדגימה פעם נוספת.
לאחר מכן, הסר את הנוזל השקוף בצינורות בעזרת פיפטה וכסה מיד את הצינורות מבלי לייבש את הדגימה.