ייצור ושקיעה מבוססת אירוסול של נבגי Bacillus subtilis
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:37 דק׳ • October 30th, 2025
התחילו בתרבית של Bacillus subtilis, חיידק עמיד מאוד ליצירת נבגים.
לחסן את התרבית למדיום מוגבל בחומרים מזינים ולדגור עם אוורור כדי לגרום לנבגים.
תאים נבגים מייצרים נבגים רדומים עם שכבות הגנה.
העבירו את התרבית לצינור ולצנטריפוגה כדי לגלול את הנבגים. הסר את הסופרנטנט המכיל את התאים הנותרים והפסולת.
שטפו את הגלולה במים מזוקקים סטריליים, חזרו על הצנטריפוגה והשעו את הנבגים במים סטריליים.
באמצעות מיקרוסקופ ניגודיות פאזה, אשר את טוהר הנבגים על ידי זיהוי נבגים בהירים ואימות היעדר מזהמים.
בצע דילולים סדרתיים של הנבגים, צלחת אגר מזין ודגירה כדי לאפשר נביטה של נבגים ברי קיימא למושבות. ספרו את המושבות כדי לקבוע את ריכוז הנבגים.
בהתבסס על ריכוז זה, התאם את כמות הנבגים וטען את הדגימה המדוללת לתוך פיית אירוסול. רססו אותו על משטח זכוכית סטרילי שבו המתלה מתייבש במהירות ליצירת שכבה חד-שכבתית דקה ואחידה של נבגים.
כדי לבצע ייצור נבגים, העבירו תרבית לילה של 5 מיליליטר מזן B.subtilis המתאים בתוספת אנטיביוטיקה מתאימה ל-200 מיליליטר של מדיום נבגי Schaeffer נוזלי בעוצמה כפולה וטפחו אותו עם אוורור נמרץ ב-37 מעלות צלזיוס למשך 72 שעות לפחות או יותר עד שיותר מ-95% מהתרבית נבגה. קצרו נבגים בצינורות של 15 מיליליטר על ידי צנטריפוגה ב-3000 גרם למשך 15 דקות וטהרו את הדגימות באמצעות H2O מזוקק סטרילי בשלבי כביסה חוזרים ונשנים
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים