JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:07 דק' • October 30th, 2025
קח דגימות נפרדות של תאי Microcystis aeruginosa חיים ומתים.
מערבבים את הדגימות ליצירת אוכלוסייה משולבת.
מיקרוציסטיס מכיל פיקוציאנין, פיגמנט אוטו-פלואורסצנטי שנשאר שלם בתאים חיים אך מתפרק בתאים מתים.
מערבל את הדגימה כדי לשבור את הגושים וליצור מתלה אחיד של תא יחיד.
הוסף בדיקה פלואורסצנטית אטומה לקרום התא, קושרת חומצות גרעין, ודגר את הדגימה בחושך כדי למנוע הלבנת פוטו.
הגשושית נכנסת באופן סלקטיבי לתאים המתים דרך הממברנות הפגועות שלהם ונקשרת ל-DNA התוך-תאי.
הפעל את הדגימה דרך ציטומטר זרימה כדי למדוד אוטו-פלואורסצנציה של פיקוציאנין ופלואורסצנציה של בדיקת חומצות גרעין באמצעות לייזרים באורך גל עירור מתאימים.
התאים החיים פולטים אוטופלואורסצנציה חזקה של פיקוציאנין אך אינם מראים אות בדיקה.
לעומת זאת, תאים מתים מציגים פליטת פיגמנט מופחתת ופלואורסצנטיות מוגברת של בדיקה, מה שמאשר נזק לממברנה.
זה מאפשר לזהות את התאים החיים העשירים בפיגמנטים מהתאים המתים.
כדי לייעל את ספיגת תאי הבדיקה המולקולרית, חשוף מחצית מהמונוקולטורה שהוכנה בעבר לתנאים המתאימים ליצירת בקרה מתה. בדוק את הווריאציות בסביבת המיקרו של הדגימה כדי לאשר את מותה של התרבית. ואז לפרק את היווצרות המושבה כפי שהודגם זה עתה.
לאחר מכן, בחר לייזר של 488 ננומטר לצד גלאי שיכול לתעד פלואורסצנטיות מבדיקות חומצות הגרעין הירוקות והכתומות. והלייזר של 640 ננומטר כדי להקליט את אותות הפיקוציאנין דרך הגלאים שלהם.