אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:48 דק׳ • October 30th, 2025
סיסטיק פיברוזיס (CF) היא הפרעה גנטית הגורמת להצטברות ריר סמיך ודביק בריאות, ויוצרת ליחה התומכת בצמיחת חיידקים פתוגניים.
להכנת ליחה CF מלאכותית, קח תמיסות בעלות תכונות ביוכימיות מרכזיות.
תערובת המוצין מכילה מוצין, שהם גליקופרוטאינים בעלי משקל מולקולרי גבוה, כדי לשכפל את צמיגות כיח ה-CF ולקדם הידבקות מיקרוביאלית.
התערובת הכימית מספקת יונים וגלוקוז לתמיכה בחילוף החומרים המיקרוביאלי.
התערובת הביולוגית מספקת חומרים מזינים לצמיחה מיקרוביאלית.
שלב הכל ליצירת מדיום הליחה המלאכותי (ASM).
הוסף חומר חציצה כדי לשמור על pH חומצי עדין המעדיף את הישרדות הפתוגן.
לעיקור בינוני, העבירו את ה-ASM לתא סינון ואקום עם פילטר ממברנה.
סנן תחת תסיסה כדי למנוע הצטברות מוצין ולמנוע סתימת מסנן.
הוואקום שואב את המדיום דרך המסנן, ומסיר מזהמים מיקרוביאליים ואגרגטים מקרומולקולריים.
ה-ASM מוכן לתרבית חיידקים הקשורים ל-CF.
הכן מדיום ליחה מלאכותי על ידי הוספת 250 מיליליטר ASCM לבקבוק 1 ליטר המכיל ASMM. לאחר מכן, הוסף 250 מיליליטר ASBM לבקבוק הבינוני. טרטר את המדיום עם מאגר MOPS בסיסי של 1 טוחנת כדי להגיע ל-pH של 6.3 על נייר pH.
מקררים את מדיום הליחה המלאכותי בחום של 4 מעלות צלזיוס עד לסינון. לאחר מכן, כדי להתחיל בתהליך הסינון, העבירו 200 מיליליטר של מדיום ליחה מלאכותי לא מסונן למערכת סינון ואקום עם מסנן בגודל נקבוביות של 0.22 מיקרומטר. לאחר חיבור מערכת הסינון למשאבת הוואקום, הפעל את משאבת הוואקום. לאחר מכן, הנח את החדר על שייקר מסלולי, רועד במהירות של 90 סיבובים לדקה בחדר קר ב-4 מעלות צלזיוס.
החלף את המסנן לאחר סינון של 350 מיליליטר של מדיום כדי להתגבר על בעיית הסתימה. לאחר סינון כמות ניכרת, הוסף מדיום נוסף של 150 מיליליטר לסינון. חזור על הסינון עם תאים נוספים עד לסינון כל המדיה.