כימות יחידות יוצרות מושבה של חיידקים הקשורים למעיים בזבובי דרוזופילה

התחל עם מיקרופלייט המכיל הומוגנטים שהוכנו מזבובי דרוזופילה . זבובים אלה הכילו אוכלוסייה מבוקרת של חיידק ספציפי במעיים שלהם.

ההומוגנטים מכילים רקמות זבוב שעברו ליזה וחיידקי מעיים משוחררים.

שאפו את החיידקים המרחפים ודללו באופן סדרתי על פני מספר מיקרו-פלטות.

אתר נפחים קטנים מכל דילול על צלחות אגר, וודא שהטיפות יישארו מופרדות.

דגירה כדי לאפשר לחיידקים להתרבות למושבות גלויות.

צלם תמונות של הלוחות כדי לכמת יחידות יוצרות מושבות (CFUs), המייצגות את מספר תאי החיידקים המסוגלים ליצור מושבות בודדות.

בעזרת תוכנת ניתוח תמונות, יישר כל תמונה באמצעות קו ייחוס, הגדר גבול והחל רשת אחידה כדי לפלח אותה לאזורי ספירה, שכל אחד מהם מתאים לנקודה אחת.

התאם את סף הבהירות כדי להבחין בין מושבות בודדות מהרקע, ולאחר מכן הפעל את הניתוח כדי לספור מושבות בכל נקודה ולכמת את ה-CFUs.

הנח שלוש צלחות גידול אגר MRS מלבניות עם מכסים פתוחים בארון הבטיחות הביולוגית לייבוש למשך 10 דקות לפחות. הכן שתי לוחות דילול על ידי הוספת 100 מיקרוליטר PBS לכל באר של צלחת סטרילית של 96 בארות באמצעות צינור 96 ערוצים. טען מתלה של קצות P-20 על צינור 96 הערוצים.

בצע דילול של 1:10 על ידי שאיבת 11.1 מיקרוליטר הומוגנט מלוח הדגימה. כעת, חלק אותו לצלחת הדילול הראשונה המכילה 100 מיקרוליטר PBS סטרילי לבאר. שמור את לוחית הדילול על שייקר הצלחת למשך 10 שניות ב-