בדיקת גידול חיידקים מוגבלת מתכת לחקר תפקידם של גנים המגיבים למתכת

קחו חיידקים מסוג פרא וחיידקים מוטנטיים שחסרים גן ספציפי המגיב למתכת הקיים בסוג הפראי.

החיידקים גדלים במצע מדולדל מתכת כדי למצות את מאגרי המתכת הפנימיים שלהם.

בסביבה מדולדלת מתכת זו, הגן המגיב למתכת בחיידקים מסוג בר מופעל ומבטא קולטן פני השטח, שאינו קיים בחיידקים מוטנטיים.

מדללים את התרביות כדי להבטיח צפיפות תאים אחידה.

קח צלחת מרובת בארות המכילה קומפלקס חלבון מתכת.

הוסף את התרבויות המדוללות לבארות.

דגרו את הצלחת בתוך קורא צלחות הנשמר בטמפרטורה מבוקרת עם ניעור כדי לקדם צמיחת חיידקים אופטימלית.

מדוד את הספיגה במרווחי זמן קבועים כדי לעקוב אחר צמיחת חיידקים לאורך זמן.

בחיידקים מסוג בר, קולטן המתכת מאפשר חילוץ של יון המתכת מהקומפלקס, ותומך בצמיחתו.

חיידקים מוטנטיים מראים צמיחה מוגבלת מכיוון שהם לא מצליחים לחלץ את יון המתכת מהקומפלקס ללא קולטני המתכת.

הוסף 10 מיקרוליטר של 10X pre-mix ו-90 מיקרוליטר CDM לכל אחת משלוש הבארות עבור הפקדים הריקים.

לאחר שהתרביות בבקבוק הזרוע הצדדית הוכפלו, הוסיפו 100 מיקרוליטר מכל תרבית לבאר שאינה בשימוש במיקרו-לוחית, ומדדו את הצפיפות האופטית ב-600 ננומטר.

לאחר חישוב כמות הדילול הנכונה הנדרשת כדי להביא את התרביות לצפיפות אופטית ב-600 ננומטר של 0.02, יש לדלל את התרביות עם CDM בצינורות תרבית קטנים, ולהוסיף נפח מספיק כדי לדלל את התערובות המוקדמות של 10X ל-1X בצלחת.

לאחר מכן,