אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:51 דק׳ • October 30th, 2025
התחל עם זן המופילוס אינפלואנזה שאינו ניתן לסוג, פתוגן בדרכי הנשימה האנושיות.
פס את תרבית החיידקים על מדיה סלקטיבית עשירה בחומרים מזינים ודגר אותה בתנאים מועשרים ב-CO2 כדי לחקות את סביבת דרכי הנשימה.
במהלך הדגירה, החיידקים מנצלים חומרים מזינים ומתרבים ויוצרים מושבות.
העבירו מושבה למדיה נוזלית סלקטיבית ודגרו כדי לקדם צמיחת חיידקים בתרבית נוזלית.
העבירו אליקוט לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה.
צנטריפוגה להפרדת החיידקים ולהשלכת הסופרנטנט.
השעו מחדש את החיידקים במאגר, צנטריפוגה שוב כדי לשטוף ולהפריד את החיידקים, והשליכו את שאריות החומר המכיל מדיה.
השעו מחדש את החיידקים במאגר ודיללו.
בעזרת ספקטרופוטומטר, מדוד את הצפיפות האופטית ב-600 ננומטר כדי להעריך את ריכוז החיידקים.
צלחת את תרבית החיידקים המדוללת על מדיה סלקטיבית ודגירה ליצירת מושבות.
ספרו את המושבות כדי לחשב יחידות יוצרות מושבות להכנת החיסון לשימוש עתידי.
צלחת את ה- NTHI על צלחת אגר שוקולד. דגרו את הצלחת הפוכה למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני. למחרת, תרבית את החיידקים במרק עירוי מוח-לב.
לאחר מכן, בצינור מיקרו-צנטריפוגה, מוסיפים מיליליטר אחד מהמרק. סובבו את התערובת בחום של 4,000 גרם למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את הגלולה במיליליטר אחד של PBS. חזור על שלב הכביסה הזה פעם נוספת.
לאחר מכן, יש לדלל 100 מיקרוליטר של תמיסה מרחפת ב-900 מיקרוליטר PBS ולמדוד את ספיגת התרבית ב-600 ננומטר. השתמש במידע זה כדי להתאים את החיסון ל-20 מיליון יחידות יוצרות מושבה למיליליטר.
לאחר מכן, קבע את הכדאיות וה-CFUs של החיסון. תרבית אחת עד עשר דילולים סדרתיים של המרק על צלחות אגר שוקולד, ודגרה על הצלחות למשך הלילה.