JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:17 דק' • October 30th, 2025
התחל עם עכבר שהורדם עם קנה נשימה חשוף. ריאות העכבר היו נגועות מראש בחיידק המופילוס אינפלואנזהe, חיידק פתוגני.
הכנס קטטר לקנה הנשימה והצמד אותו למזרק מלא במאגר כביסה.
יש לנהל את מאגר הכביסה המכיל נוגד קרישה למניעת היווצרות קרישי דם וסוכר לשמירה על שלמות התאים.
שאפו בעדינות כדי לשחזר את נוזל שטיפת הסימפונות המכיל כדוריות דם אדומות, תאי חיסון ושאריות פתוגנים.
חזור על ההליך ואסוף את נוזל השטיפה המוחזר לתרחיף יחיד.
קח אליקוט מהתרחיף והצנטריפוגה המאוגדים כדי להפריד בין התאים. השליכו את הסופרנטנט.
השעו מחדש את התאים במאגר ליזה כדי ליז באופן סלקטיבי את כדוריות הדם האדומות.
צנטריפוגה כדי להפריד את התאים הנותרים ולהשליך את הסופרנטנט המכיל פסולת.
השעו מחדש את התאים הנותרים במאגר.
התרחיף הסופי, המכיל תאים חיסוניים ושאריות חיידקים, מוכן לניתוח במורד הזרם.
חשוף את החלק הגחוני של הריאה כדי לגשת לקנה הנשימה. צנרור קנה הנשימה עם קטטר בגודל 20.
באמצעות הצנתר, החדירו 0.8 מיליליטר של מאגר BALF ואספו את השטיפה על ידי שאיבת שיניים. חזור על הליך זה שלוש פעמים נוספות, ואגד את ארבעת אוספי השטיפה לתרחיף אחד.
קח אליקוט של 100 מיקרוליטר וסובב במשך שתי דקות ב-2,000 סל"ד.
הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש במאגר הליזיס של RBC. סובב אותו והשהה מחדש את הגלולה עם 1X PBS.