סנכרון תרביות ציאנובקטריאליות ודחיסת דנ"א המונעים על ידי מחזורי אור-חושך

התחל עם צלחת אגר עשירה בחומרים מזינים בתוספת תיוסולפט.

פס את הציאנובקטריה ודגירה בתקופות אור וחושך לסירוגין כדי לשמור על המחזור הביולוגי.

במהלך תקופת האור, ספיגת חומרים מזינים ותיוסולפט תומכים בצמיחת חיידקים ובעיבוי ה-DNA.

בתקופה החשוכה, התאים משמרים אנרגיה ומתחלקים.

מחזור האור-חושך לסירוגין מסנכרן תאים לאותו שלב של צמיחה וחלוקה.

לאחר תקופת האור, הוסף תמיסת סוכרוז ופיפטה שוב ושוב כדי לשחרר ציאנובקטריה, מה שגורם לשינוי צבע. העבירו את התאים לצינור.

הוסיפו צבע פלואורסצנטי ספציפי ל-DNA ודגרו בחושך. הצבע נקשר ל-DNA הציאנובקטריאלי.

צנטריפוגה להפרדת הציאנובקטריה והסרת הסופרנטנט.

השעו מחדש את הציאנובקטריה בתמיסת סוכרוז, העבירו את התרחיף למגלשה וכסו אותו.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, ה-DNA המעובה הכחול בתאים מאשר את ההתקדמות המסונכרנת והביולוגית של מחזור התא הציאנובקטריאלי.

התחל בגידול ציאנובקטריה על צלחות BG-11 מעוקרות באורך תשעה סנטימטרים המכילות 1.5% אגר ו-0.3% נתרן תיוסולפט. דגרו את הלוחות בטמפרטורה של 23 מעלות צלזיוס תחת מחזור אור של 12-12 עם 50 מיקרו-E אור למ"ר לשנייה. כדי לשמור על התאים, העבירו אותם לצלחות אגר BG-11 טריות מדי שבוע.

תוך שבוע, תרבויות מופיעות כפסים ירוקים. העבירו את גושי התאים הירוקים באמצעות לולאה מעוקרת להבה, ופסו אותם על הצלחת החדשה. כדי לצפות בדחיסת DNA, אסוף את התאים שגודלו במשך שישה ימים בתום תקופת האור.

כדי לשחרר את התאים מהצלחת, הוסף מיליליטר אחד של סוכרוז 0.2 מולארי. לאחר מכן, אספו את תרחיף התאים, וחזרו על הוספת הסוכרוז והסרתו עד שהתמיסה הופכת לירוקה. שינוי הצבע מצביע על כך שרוב התאים שוחררו.

כעת, העבירו 500 מיקרוליטר של תמיסת תאים מרחפים לשפופרת מיקרופוגה, והוסיפו כתם הוכסט לריכוז סופי של מיקרוגרם אחד למיליליטר. לאחר מכן, תנו לתאים לדגור בחושך למשך 10 דקות. לאחר מכן, סובבו את התאים, השליכו את הסופרנטנט והשעו אותם מחדש ב-10 מיקרוליטרים של סוכרוז 0.2 מולארי.

לאחר מכן, העבירו מיקרוליטר אחד של המתלה למגלשת זכוכית, הניחו תלוש כיסוי והתבוננו בתאים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי המצויד במסנן UV. באמצעות מטרת טבילה של פי 100 בשמן, חפש עדויות לדחיסת DNA, שאמורה להיות ניתנת לצפייה ברוב התאים.