JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:15 דק' • September 26th, 2025
פלסטוגלובולות הן טיפות עשירות בשומנים בציטופלזמה של ציאנובקטריה.
הם מאחסנים שומנים ניטרליים בתוך ליבה הידרופובית, מוקפים בחד-שכבת שומן אמפיפתית עם חלבונים מבניים ואנזימטיים משובצים. השומנים המאוחסנים מגויסים בזמן לחץ כדי לתמוך בתפקודי התאים.
כדי לבודד אותם, התחל עם שבר פלסטוגלובול גולמי המתקבל מציאנובקטריה. חלק זה מועשר בפלסטוגלובולות וכולל כמה חלבונים מזהמים שיוריים.
מערבבים את השבר הזה עם תמיסת סוכרוז צפופה יותר ומעבירים אותו לצינור אולטרה-צנטריפוגה.
שכבה עם תמיסת סוכרוז קלה יותר ליצירת שיפוע צפיפות לא רציף.
צנטריפוגה במהירות גבוהה בתנאי קור למניעת השפלה תרמית של פלסטוגלובולים.
השיפוע מפריד בין רכיבים לפי צפיפות: פלסטוגלובולים עשירים בשומנים ובצפיפות נמוכה צפים למעלה, בעוד מזהמים צפופים ועשירים בחלבון שוקעים.
אסוף את הפלסטוגלובולים המטוהרים והקפיא אותם במהירות במדיום מקפיא כדי לשמר את המבנה שלהם.
יש לאחסן בטמפרטורות נמוכות במיוחד לשימוש ארוך טווח.
כדי לקצור פלסטוגלובולות טהורות מציאנובקטריה, צור שיפוע סוכרוז, כפי שהוזכר קודם לכן, תוך שימוש ב-500 מיקרוליטר של הפלסטגלובולות הגולמיות, 750 מיקרוליטר של R בינוני 0.7 ו-750 מיקרוליטר של R בינוני 0.2. לאחר הצנטריפוגה, יש לאסוף את הפלסטגלובולות הטהורות בצינור של 1.5 מיליליטר ולסלק את הפלסטגלובולות הטהורות. לאחר שתסיים, הקפיא בזק את הפלסטגלובולות הטהורות בחנקן נוזלי ואחסן אותם ישירות במינוס 80 מעלות צלזיוס או ליופיליזציה לאבקה יבשה.