אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:22 דק׳ • October 30th, 2025
התחל עם תולעי C. elegans בוגרות נטולות חיידקים תלויות במדיה.
הציגו את חיידק הבדיקה ודגרו.
כאשר התולעים ניזונות, חיידקים נכנסים ללומן המעי ונצמדים לאפיתל.
צנטריפוגה כדי לגלול את התולעים ולהסיר את החיידקים שאינם נבלעים.
השעו מחדש במאגר, צנטריפוגה והסר את החיידקים הנותרים שלא נבלעו.
הוסף חומר המכיל E. coli הורג בחום והדגירה.
במהלך האכלה, האי קולי המומת בחום עוקר ומוציא חיידקי בדיקה שאינם נדבקים מלומן המעי.
צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט המכיל את החיידקים שנפלטו.
שוטפים עם חיץ, צנטריפוגה ומסירים את הסופרנטנט.
צננו את התולעים על קרח כדי לגרום לשיתוק, ולמנוע בליעה נוספת.
הוסף תמיסת אקונומיקה ודגר כדי להרוג שאריות חיידקים חיצוניים.
הסר את האקונומיקה והוסף חיץ קר.
צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט כדי לחסל שאריות אקונומיקה.
התולעים שומרות כעת רק על חיידקי בדיקה ברי קיימא שנדבקו לאפיתל המעי, מה שמאפשר לכמת את הקולוניזציה.
התחל בהשעיית דגימת התולעת במיליליטר אחד של M9TX-01 בצינור מיקרוצנטריפוגה. אסוף את התולעים הבוגרות על ידי צנטריפוגה והשליך את הסופרנטנט. באמצעות אותם פרמטרים של צנטריפוגה, שטפו את התולעים פעמיים עם מיליליטר אחד של M9TX-01 ופעם אחת עם מיליליטר אחד של מאגר תולעים M9 כדי למזער את החיידקים החיצוניים. לאחר מכן, השעו מחדש כל דגימה במיליליטר אחד של מדיום S בתוספת OP50 מומת חום פי 2 בצינור תרבית. דגרו את הצינורות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס למשך 20 עד 30 דקות כדי להעביר את החיידקים שאינם נדבקים מהמעיים.
לאחר הדגירה, שטפו את התולעים המטוהרות פעמיים עם מיליליטר אחד של M9TX-01 קר והשליכו את הסופרנטנט. שים את הצינורות על קרח למשך 10 דקות כדי לשתק את התולעים. לאחר מכן, הוסף מיליליטר אחד של מאגר תולעים M9 קר כקרח עם אקונומיקה ללא ריח לכל צינור.
דגרו את הצינורות על קרח למשך 10 דקות לפחות כדי להרוג חיידקים חיצוניים. השליכו את מאגר האקונומיקה והחזירו את הצינורות לקרח כדי למנוע מהתולעים לשאוב. לאחר מכן, הוסף מיליליטר אחד של M9TX-01 קר לכל צינור וצנטריפוגה למשך חמש שניות במיני צנטריפוגה. מחזירים את הצינורות לקרח ומסירים את הסופרנטנט. חזור על שלב זה פעם אחת.