כימות קוטביות ודינמיקה של רכיב מערכת הפרשה בלגיונלה פנאומופילה

התחל עם Legionella pneumophila, פתוגן נשימתי המבטא רכיב מערכת הפרשה מתויג פלואורסצנטי הנדרש לזיהום מארח.

כדי לכמת את הקוטביות של רכיבים אלה, לרכוש תמונות פלואורסצנטיות ולהתאים את הניגודיות כדי להבחין בין תאים בודדים.

מקם אזורים מלבניים מקוטב התא לכיוון הציטופלזמה כדי למדוד שיפועי פלואורסצנטיות.

מסווה אזורים אלה כדי לחלץ עוצמה ושונות ממוצעת, ולאחר מכן חשב את ציוני הקוטביות כיחסי שונות לממוצע.

ציוני קוטביות גבוהים מצביעים על גיוס ממוקד של רכיבים בקטבי החיידקים.

למדידות דינמיות, צלם שתי תמונות דולג זמן והתאם את הניגודיות כדי לדמיין את התאים בבירור.

מקם אזורים מרובעים במרכז התא כדי למדוד פלואורסצנטיות ציטוזולית.

מסכה תאים שלמים כדי לתקן פוטו-הלבנה ולהגדיר אזורי רקע בין תאים להפחתת רעש.

ייצא את כל העוצמות וחשב את השינוי בקרינה לאורך זמן.

עוצמה מוגברת מצביעה על אשכולות, בעוד ירידה בעוצמה משקפת את ההתפלגות הדינמית מחדש של רכיבי ההפרשה בתוך החיידקים.

כדי לכמת את הקוטביות, התאם את ניגודיות התמונה כך שהחיידקים ייראו בבירור.

לאחר מכן התקרב לאזור העניין והשתמש בכלי האזור כדי למקם מלבן בגודל 0.25 על 1.3 מיקרומטר שמתחיל בקוטב ונמשך לתוך הציטופלזמה, וודא שהמלבן נשאר בתוך גבולות החיידקים.

סמן לפחות 200 חיידקים וצור מסכות באמצעות כפתור האזור למסכה בתפריט הניתוח. לחץ על סטטיסטיקת המסכה ובחר אובייקט תחת טווח המס