JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:03 דק' • October 30th, 2025
התחל בתרבית של Legionella pneumophila, חיידק פתוגני.
לתאי חיידקים אלה יש מערכת הפרשה על הממברנה שלהם, החיונית לזיהום מארח.
השעו את תאי החיידקים במים סטריליים כדי להשיג את הצפיפות הנדרשת להדמיית טומוגרפיה אלקטרונית קריוגנית (cryo-ET).
הוסף ננו-חלקיקי זהב, המשמשים כנקודות ייחוס ליישור תמונה במהלך שחזור תלת מימדי.
קח רשת עם סרט פחמן מחורר כדי להפקיד את דגימת החיידקים.
הנח את הרשת בתוך תא מלא בגז והחל פריקה חשמלית כדי להפוך את המשטח להידרופילי יותר.
מרחו את המתלה על הרשת, ואפשרו לנוזל להתפשט באופן אחיד על פני השטח ולתאים להתייצב.
הסר עודפי מים מהרשת וצלול אותם לתוך מדיום הקפאה נוזלי כדי להקפיא את הדגימה ולשמור על הארכיטקטורה הסלולרית שלה.
הדגימה מוכנה כעת להדמיית cryo-ET של מערכת הפרשת החיידקים.
כדי להכין את דגימת הקריוטומוגרפיה האלקטרונית, גדל טלאי כבד של Legionella Pneumophila על לוחות CYE-agar-streptomycin למשך 48 שעות ב-37 מעלות צלזיוס.
השעו מחדש את התאים במים ל-OD600 של כ-0.7. לאחר מכן הוסף חמישה מיקרוליטרים של חלקיקי זהב קולואידים ל-20 מיקרוליטר של תרחיף התא. זוהר לפרוק רשת פחמן חור ולפפט עליה חמישה מיקרוליטרים מתערובת התאים.
תן לזה לעמוד דקה אחת. כתם את הרשת בנייר סינון והקפיא אותה באתאן נוזלי באמצעות מכשיר בוכנה מונע כוח הכבידה.