גידול החיידק Vibrio natriegens הגדל במהירות

קחו שפופרת המכילה תרבית של Vibrio natriegens, חיידק שגדל במהירות.

צנטריפוגה את התרבות כדי לגלול את החיידקים. השליכו את ה-supernatant המכיל שאריות מדיה.

השעו מחדש את גלולת החיידקים במדיה טרייה והעבירו אותה לבקבוק חרוטי המכיל את אותה מדיה להכנת תרבית חיידקים.

דגירה של התרבות בטלטול בתנאים מאווררים.

בשל זמן דור קצר, Vibrio natriegens משתמש בחומרים מזינים ומתחלק במהירות ליצירת אוכלוסיית חיידקים מרוכזת.

באמצעות ספקטרופוטומטר, עקוב באופן קבוע אחר הצפיפות האופטית (OD) כדי לקבוע את ריכוז החיידקים.

גדל את התרבית עד שה-OD מגיע ל-1 בערך, מה שמעיד על שלב צמיחה אקספוננציאלי עם פעילות מטבולית גבוהה.

העבירו את התרבות לצינורות צנטריפוגה.

צנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה להפרדת החיידקים תוך שמירה על שלמות התא.

הניחו את הצינורית על קרח והסירו את החומר המכיל פסולת תאית.

אחסן את גלולת החיידקים בטמפרטורה נמוכה במיוחד לניתוח במורד הזרם.

כדי להתחיל, שטפו מיליליטר אחד מתרבית Vibrio natriegens למשך הלילה על ידי צנטריפוגה בצנטריפוגה על שולחן ב -10,600 פעמים גרם למשך דקה אחת.

שאפו את הסופרנטנט מבלי להפריע לגלולה, והשעו מחדש במיליליטר אחד של מדיה LB-V2 טרייה. חסנו מיליליטר אחד של תרבית לילה שטופה לליטר אחד של מצע גידול LB-V2 טרי בבקבוק ארלנמאייר מבולבל בנפח 4 ליטר עם כיסוי סטרילי כדי להשיג יחס דילול של 1 עד 1,000. גדל תרבות ב-3