הכנת תמצית תאים גולמיים מ-Vibrio natriegens
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:58 דק׳ • October 30th, 2025
קח תרחיף של Vibrio natriegens, בעל קצב סינתזת חלבון גבוה, במאגר מקורר כדי למנוע פירוק תאי.
צנטריפוגה בתנאי קור.
השליכו את חומר העל כדי להסיר מזהמים.
השעו מחדש את הגלולה בנפח קטן של מאגר צונן.
בעזרת קצה בעל קדח רחב, העבירו את המתלה לצינור מיקרו-צנטריפוגה כדי למנוע גזירה מכנית.
מערבבים את המתלה ומניחים את הצינור במחזיק הממוקם על קרח.
הורד את קצה הסוניקטור לתוך המתלה.
ליזום סוניקציה כדי לשבש את קרום התא ולשחרר תוכן ציטופלזמי.
צנטריפוגה להפרדת פסולת התאים הבלתי מסיסים.
יש לאסוף את תמצית התאים הגולמיים או תמצית התאים הגולמיים המכילה תוכן ציטופלזמי לתוך שפופרת טרייה.
Flash מקפיא את תמצית התא בחנקן נוזלי כדי לשמר את הפעילות הביולוגית שלו.
יש לאחסן בטמפרטורות נמוכות במיוחד לשימוש נוסף בביטוי חלבון נטול תאים.
מאגר ליזה S30 טרי מוכן pH של 7.7 עד כארבע מעלות צלזיוס, השתמש ב-10 מיליליטר של מאגר ליזה S30 קר זה כדי להשעות מחדש את כל הכדורים הנובעים מאותה תרבית ליטר אחד ולהעביר את המתלה לצינור של 50 מיליליטר. צנטריפוגה את התרחיף הזה ב-3,500 פעמים גרם למשך 10 דקות בארבע מעלות צלזיוס, ולאחר מכן שואב את הסופרנטנט מבלי להפריע לכדור ומניח אותו על קרח.
בעבודה בחדר קירור, הוסף 500 מיקרוליטר של מאגר ליזה S30 קר לגלולה בצינור של 50 מיליליטר המונח על קרח. השתמש בקצה פיפטה רחב כדי להשעות מחדש את הגלולה ולהעביר אותה בזהי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים