ניטור בזמן אמת של גדילת חיידקים באמצעות מערכת תרבית מיקרו-טיפות מיקרופלואידית

התחל עם תא תרבית מיקרו-טיפות המכיל שבב מיקרו-נוזלי עם מחברים הנשלטים על ידי משאבה לזרימת נוזלים ופינוי פסולת.

הניחו בקבוק ריאגנט המכיל תרחיף חיידקי מכוסה בשמן בתוך החדר.

חבר את הצינור העליון של הבקבוק ליציאת משאבה ואת הצינור הצדדי למחבר שבב. סגור את החדר.

הגדר את הפרמטרים של עקומת הצמיחה. לאחר מכן, התחל את יצירת הטיפות.

כאשר תרחיף שמן וחיידקים מתכנסים בצומת T, גזירת השמן מפרקת את שלב החיידקים המימי למיקרו-טיפות אחידות ועוטפות חיידקים.

לאחר יצירת הטיפות, הסר את הבקבוק, חבר את מחבר השבב ליציאת המשאבה וסגור את החדר.

כאשר כל טיפה עוברת בנתיב הזיהוי, בדיקת סיבים אופטיים מודדת את הצפיפות האופטית שלה, המייצגת את ריכוז החיידקים.

הזיזו את המיקרו-טיפות קדימה ואחורה כדי לאפשר גדילה של חיידקים.

עם הזמן, הסיב האופטי מודד את הצפיפות האופטית של הטיפה, ויוצר עקומת גדילה.

השתמש במזרק סטרילי של 10 מיליליטר כדי להזריק שלושה עד חמישה מיליליטר שמן MMC ממחט המזרק לצינור הצד לתוך בקבוק המגיב. לאחר מכן הטה וסובב את בקבוק המגיב באיטיות כדי לגרום לשמן לחדור במלואו לדופן הפנימית.

לאחר הזרקת חמישה מיליליטר של תמיסת חיידקים ראשונית לבקבוק, מלאו את בקבוק המגיב על ידי הזרקת חמישה עד שבעה מיליליטר של שמן MMC. משוך החוצה את המחבר המהיר העצמאי A של בקבוק המגיב והכנס את המחבר המהיר A למחבר המהיר B של הבקבוק כדי להשלים את פעולת הזרקת הדגימה. לאחר שתסיים, פתח את דלת תא ההפעלה כדי להכניס את בקבוק המגיב לאמבט המתכת.

משוך החוצה את מחבר ה-C2 של השבב ואת המחבר המהיר A של בקבוק המגיב. חבר את מחבר הצינור הצדדי של בקבוק המגיב למחבר C2 ואת מחבר הצינור העליון למחבר O2. לאחר מכן, סגור את דלת תא הניתוח.

כדי לבחור את הפונקציה של מדידת עקומת גדילה, לחץ על עקומת צמיחה. בממשק הגדרת הפרמטרים, הזן את המספר כ-15. לאחר מכן, הפעל את מתג זיהוי ה-OD והגדר את אורך הגל כ-600 ננומטר. לחץ על הכרטיסייה התחל כדי להתחיל ביצירת טיפות.

התהליך יימשך 15 דקות.

כאשר מופיע חלון מוקפץ בממשק הראשי המבקש הודעה, פתח את דלת תא ההפעלה כדי להוציא את בקבוק המגיב ולחבר את מחברי C2 ו-O2. לאחר סגירת הדלת, לחץ על כפתור אישור בחלון המוקפץ כדי לטפח אוטומטית את הטיפות ולזהות את ערכי ה-OD.

כאשר עקומת הגידול מגיעה לשלב הנייח, לחץ על לחצן ייצוא נתונים כדי לייצא את נתוני ה- OD. בחר את נתיב שמירת הנתונים וייצא את ערך ה-OD שנרשם במהלך תקופת הטיפוח בפורמט CVS נקודה. כדי לשרטט את עקומת הצמיחה, השתמש בתוכנות מיפוי כגון Excel ו-Origin 9.0.