אבולוציה אדפטיבית של חיידקים באמצעות מערכת תרבית מיקרו-טיפות מיקרוביאלית

הזרקת תרבית חיידקים המהונדסת לסבילות למתנול לבקבוק מגיב אחד ומדיום לחץ עם ריכוז מתנול גבוה לבקבוק אחר.

הוסף שמן לשניהם והניח אותם במערכת תרבית מיקרו-טיפות מיקרוביאלית כדי להגיע לטמפרטורת הדגירה.

בעזרת משאבה דוחפים את הנוזלים דרך שבב מיקרופלואידי.

תרבית החיידקים מתערבבת עם מדיום הלחץ. השמן מפריד את התערובת למיקרו-טיפות, הנעות קדימה ואחורה לגידול.

בתחילה, מתח מתנול גבוה מאט את צמיחת החיידקים.

עם הזמן, חלק מהתאים רוכשים מוטציות המשפרות את ניצול המתנול ומתרבות.

המערכת מודדת את צפיפות החיידקים ובוחרת טיפות המראות צמיחה גבוהה יותר.

אלה מעורבבים מחדש עם מדיום הלחץ כדי להעשיר לניצול גדול יותר של מתנול.

לאחר מספר מחזורים, מחלצים טיפות בעלות צפיפות חיידקים גבוהה, מורחים אותן על אגר ודוגרים.

לבודד ולתרבית את המושבות שנוצרו במדיום נוזלי כדי להשיג זנים מותאמים למתנול.

הזרקו את הכמויות הנדרשות של תמיסת החיידקים הראשונית, המדיום הטרי ושמן MMC לבקבוקי הריאגנטים המעוקרים הנפרדים לתמיסת החיידקים הראשונית במדיום הטרי, כפי שהוסבר קודם לכן.

כדי לבחור את הפונקציה של אבולוציה אדפטיבית, לחץ על ALE בתוכנה. בממשק הגדרת הפרמטרים, הפעל את מתג זיהוי OD, ולאחר מכן הגדר את כל הפרמטרים המתוארים בכתב היד ולחץ על התחל לשונית כדי להתחיל ביצירת טיפות. התהליך ייקח כ -25 דקות.

במהלך כל תקופת תת-גידול, שימו לב אם ערכי ה-OD המקסימליים של הטיפות גדלו באופן משמעותי. אם הגידול מתרחש ועומד בדרישות הניסוי, לחץ על כפתור ייצוא הנתונים כדי לייצא את נתוני ה-OD. כדי לחלץ את טיפות היעד מה-MMC, לחץ על לשונית הסינון כדי לבחור את הפונקציה של חילוץ טיפות.

לאחר מכן, בחר באפשרות איסוף ולחץ על מספרי טיפות היעד. בסיום, לחץ על אישור. המתן לחלון המוקפץ המבקש הודעה. לאחר מכן, הכנס את המחבר המהיר CF לצינור המיקרו-צנטריפוגה לאיסוף ולחץ על אישור. לאחר דקה עד שתיים כאשר ממשק התוכנה יקפוץ חלון חדש המבקש הודעה, הכנס את המחבר המהיר של CF בחזרה ולחץ על אישור כדי לגרום ל-MMC להמשיך לפעול.

כאשר טיפת המטרה הבאה מגיעה לאתר זיהוי הטיפות, אסוף אותה כפי שצוין קודם. השתמש בפיפטה של 2.5 מיקרוליטר כדי להוציא ולהניח את הטיפה על צלחת מוצקה של 90 מילימטר, ואחריה לפזר את הטיפה באופן שווה עם מוט מצופה משולש זכוכית באורך צד של שלושה סנטימטרים, ואז לטפח את הטיפה בחממה בטמפרטורה קבועה של 37 מעלות צלזיוס למשך 72 שעות. מאוחר יותר, בחרו שלוש עד חמש מושבות עצמאיות של חיידקים כדי לטפח כל מושבה בנפרד בבקבוק שייק של 50 מיליליטר עם 10 מיליליטר של מדיום טרי באינקובטור רועד ב-200 סיבובים לדקה ו-37 מעלות צלזיוס למשך 48 עד 72 שעות.

לאחר הדגירה, פעל לפי התקנות הסטנדרטיות הקשורות לאחסון תמיסת החיידקים המתורבתים בצינור הגליצרול.