אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 4:37 דק׳ • October 30th, 2025
קחו תרבית של Phormidium lacuna, ציאנובקטריום נימי.
הומוגניזציה של התרבית כדי לפזר את החוטים, ואז צנטריפוגה כדי לגלול את החיידקים.
השליכו את הסופרנטנט והשעו את הגלולה במדיה עשירה בחומרים מזינים.
הוסף DNA פלסמיד המכיל חלבון פלואורסצנטי ירוק וגנים עמידים לאנטיביוטיקה על צלחת אגר בתוספת אנטיביוטיקה.
מוסיפים את תרחיף החיידקים מעל ה- DNA ודוגרים בתנאי אור.
החיידקים מפנימים את ה-DNA באמצעות פילי מסוג IV. הגנים שהוכנסו משתלבים באחד העותקים המרובים של גנום החיידקים.
הפיצו מחדש את החיידקים על צלחת אגר בתוספת אנטיביוטיקה כדי לבחור את החיידקים שעברו טרנספורמציה.
תחת מיקרוסקופ אור, זהה חוטים בריאים וירוקים המעידים על טרנספורמציה מוצלחת.
העבירו את החוטים שנבחרו לחומר נוזלי עם ריכוז אנטיביוטיקה גבוה יותר כדי להעשיר את האוכלוסייה שהשתנתה.
שוב, צלחו אותם על אגר עם רמות אנטיביוטיקה גבוהות יותר להפרדת טרנספורמציה.
דמיין ביטוי GFP תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לאשר טרנספורמציה מוצלחת.
התחל בחיסון 50 מיליליטר נוזלי F2 מדיום לכל אחת משתי הצלוחיות של 250 מיליליטר עם מיליליטר אחד של חוטי P. lacuna מתרבית ריצה. לטפח באור לבן תחת תסיסה במשך כחמישה ימים בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס.
לאחר חמישה ימים, הומוגניזציה של 100 מיליליטר של תרחיף תאי P. lacuna ב-10,000 סל"ד למשך שלוש דקות ומדוד את הצפיפות האופטית ב-750 ננומטר. לאח
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים