JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:44 דק' • October 30th, 2025
התחל בתרבית של חוטי Phormidium lacuna .
הומוגניזציה קצרה של התרבית כדי לפרק אשכולות נימה וליצור מתלה אחיד.
העבירו את הדגימה ההומוגנית לצלחת פטרי והניחו לה לנוח.
מכסים את הצלחת בצלופן כדי להפחית את האידוי.
הנח שקופית על במת המיקרוסקופ כדי לשמש כפלטפורמת תמיכה.
מקם את הצלחת המכילה את הדגימה ישירות על גבי השקופית.
השתמש בעדשה אובייקטיבית בעלת הספק נמוך והתמקד בחוטי החיידקים התלויים במדיום כדי לצפות בתנועתם.
החוטים מציגים תנועה איטית ומחליקה על פני השטח, המונעת על ידי פילי מסוג IV - הסיבים המיקרוסקופיים המורכבים בממברנה הפנימית ויוצאים דרך הממברנה החיצונית.
סיבים אלה נמתחים ונסוגים כדי למשוך את התאים קדימה, ומאפשרים להם להחליק.
בדיקה זו חושפת את תנועתיות הגלישה האופיינית של Phormidium lacuna בסביבה נוזלית.
לטפח P. lacuna במדיום F2 מתחת ל-50 סל"ד תסיסה אופקית באור לבן במשך כחמישה ימים עד שהצפיפות האופטית המשוערת ב-750 ננומטר הופכת ל-0.35. אחסן את הדגימה בארבע מעלות צלזיוס. הומוגניזציה של החוטים עם אולטרסאונד למשך דקה אחת בעוצמה מקסימלית ומחזור של אחד.
מדוד את הצפיפות האופטית ב-750 ננומטר והעביר שמונה מיליליטר של המדיום המכיל P. lacuna לצלחת פטרי של שישה סנטימטרים. המתן מספר דקות עד שהדגימה תגיע לטמפרטורת החדר ולאחר מכן כסה את צלחת הפטרי בנייר כסף צלופן. הנח שקופית מיקרוסקופ על שולחן XY של מיקרוסקופ רגיל עם מצלמה.
הפעל את אור המיקרוסקופ והעבר אובייקט 4X או 10X לנתיב האור. לאחר מכן, הניחו את צלחת הפטרי על גבי השקופית. התאם חוטים בודדים או צרורות נימה לפי תנועות X, Y ו-Z של השולחן.
התבונן בתנועות של חוטים בודדים או צרורות והקלט את התנועות באמצעות מצלמת מיקרוסקופ רגילה. ודא שעדשת המטרה אינה נוגעת בנוזל.