בדיקה פלואורסצנטית בתפוקה גבוהה לחקר אינטראקציות בין מיקרואורגניזמים לתולעים

התחל עם צינור המכיל תולעי C. elegans .

העבר את התולעים ללוח רב-באר עם מדיום אגרוז עשיר בחומרים מזינים המכיל את חיידקי הבקרה או את חיידקי הבדיקה.

במהלך הדגירה, התולעים בולעות חיידקים, המתיישבים באפיתל המעי ומשחררים חומצות אמינו המשמשות כמקור תזונה. חומצות האמינו הללו מתפרקות לנגזרות חומצות אמינו ומאוחסנות בגרגירי מעי הקשורים לליזוזום.

לאחר מכן, הוסיפו בופר טרי והעבירו את התולעים ללוח בדיקה שחור רב-ואר.

הוסף גורם לחץ כימי לכל באר ואטום את הלוח.

הנח את הפלטה בקורא פלטות פלואורסצנציה והקלט את הפלואורסנציה.

בתולעים, גורם הלחץ גורם ללחץ חמצוני, הפוגע בתאי האפיתל של המעי.

דבר זה גורם לגרגירי המעי הקשורים לליזוזום להתפוצץ, ולשחרר נגזרות חומצות אמינו, אשר בחשיפה לאור אולטרה סגול מתגלגלות בכחול מתפלל.

השווה את הפלואורסצנציה של תולעים שנחשפו למערכת הבקרה ובדקו חיידקים כדי להעריך את יעילות ההתיישבות של חיידקים ואת השפעתם על תגובת הלחץ החמצוני של המארח.

כוון את ריכוז התולעים ל-15 תולעים למיקרוליטר בצינור הקוני של 15 מיליליטר. לאחר מכן, העבר 8 מיקרוליטר של תמיסת תולעת לכל אחד מהבארות של שמונת לוחות האגרוז של 96 בארות NGM באמצעות פיפטה רב-ערוצית או פיפטה חוזרת.

לאחר 36 שעות, יש לשחרר 30 מיקרוליטר M9 לכל באר של לוח 96 הבארות. לאחר מכן, העבירו תולעים ללוח 384 בארות בהתאם לפריסות קבועות באמצעות קצות אחיזה נמו