הכנת לוח מיקרופלואידי עם תאים חיידקיים

קחו לוח מיקרופלואידי המכיל זוגות של בארות קלט ופלט המחוברים על ידי תעלות מיקרופלואידיות, הכוללות תעלות סרפנטיניות ותעלה ניסיונית.

כדי להפריים את הערוצים, הוסף מדיה למערכת היציאה.

הנח את הפלטה בשלב פלטה ואטום אותו עם כיסוי סטרילי.

הפעל את זרימת המדיה מבאר היציאה לבאר הכניסה כדי לשטוף את כיסי האוויר הכלואים בתוך הערוצים.

הסר את הצלחת. השליכו את שאריות המדיה מבאר היציאה והוסיפו תרבית חיידקים.

לבאר הקלט, הוסף מדיה טרייה כדי למנוע זרימת אוויר חוזרת. החזר את הצלחת לבמה.

בעת התבוננות תחת מיקרוסקופ, יש לחדש את הזרימה כדי למשוך תאים לתעלה הניסיונית.

כוון את קצב הזרימה כדי למנוע כניסת תאים לתעלות הסרפנטיניות ולמנוע סתימה.

עצור את הזרימה ודגר כדי להקל על היצמדות חיידקים.

הסר את הפלטה וזרוק את תרבית החיידקים והמדיה שנותרו.

החיידקים בתוך לוח המיקרופלואיד מוכנים כעת לניסויים נוספים.

לצורך פריימינג, תחילה יש להסיר את לוח המיקרופלואיד בעל 48 בארות מהאריזה, מבלי לגעת במשטח הזכוכית בתחתית הלוח, ולנקות את מחסנית הזכוכית בתחתית הלוח עם טישו עדשה. כדי להכין את תעלות המיקרופלואיד, פיפטה של 200 מיקרוליטר של מדיום מינימלי של 37 מעלות צלזיוס לתוך באר היציאה, תוך שמירה על הימנעות מבועות. לאחר מכן מניחים את הפלטה על שלב הפלטה.

נגב את הממשק באתנול, ואטום אותו על שלב הצלחת לאחר שהאתנול התייבש. במצב ידני על מודול הבקרה, כוון את הנוזל כמרק לוריה-ברטאני ב-37 מעלות צלזיוס, ומקסימום שיכול להיות חמישה דיין לסנטימטר רבוע. לחצו על בארות היציאה כדי להפעיל את הזרימה מהפלט לבאר הקלט, כדי להכין את הערוצים.

לאחר חמש דקות, עצרו את הזרימה כדי להתכונן לזרעה, והסירו בזהירות את הצלחת מהשלב. לאחר מכן, שואף כל מדיום שאריתי מבאר היציאה מבלי להסיר שום מדיום מהמעגל הפנימי שמוביל לתעלות המיקרופלואידיות. כדי לזרוע את תעלות הניסוי, הוסף 300 מיקרוליטר של מדיום מינימלי לבאר הקלט, ולאחר מכן להוסיף 300 מיקרוליטר של תרבית חיידקים לבאר הפלט.

החזירו את הלוח לשלב ההדמיה, תוך וידא לנקות את הממשק באתנול לפני שמניחים אותו על הפלטה, והשתמשו בשידור חי של המצלמה כדי להתמקד בערוץ יחיד. בעת ניטור ויזואלי של השידור החי, יש לחדש את הזרימה בקצב של 1 עד 2 דיין לסנטימטר רבוע למשך כ-2 עד 4 שניות, כדי לאפשר לתאים להיכנס לערוץ הניסוי אך לא לתעלות הסרפנטיניות, ולהשאיר את הלוח על הבמה המבוקרת בטמפרטורה למשך שעה, כדי לאפשר לתאים להתחבר. בסיום תקופת ההצמדה, יש להסיר בזהירות את הפלטה מהשלב ולשאוף את החיידקים מהפלט היטב מבלי להפריע לתעלה.

לאחר מכן, השתמש בקצה פיפטה חדש כדי להסיר את המדיום מבארות הקלט.