הכנת פלטות ננו-צלולוזה חיידקיות מחיידקים מייצרי תאית

קח מיקרופלטה מלאה במדיום תזונתי המכיל מניטול.

החסנו כל באר בחיידק שמייצר תאית ודגרו בתנאים סטטיים.

במהלך הדגירה, החיידקים סופגים מניטול ומחליפים אותו לגלוקוז.

גלוקוז זה מועבר לקומפלקסים של סינתאז צלולוז המוטמעים בקרום החיידקי ומפולימר לשרשראות גלוקאן.

שרשראות אלו מתפשטות אל המרחב החוץ-תאי, שם הן מתגבשות למיקרופיברילים.

המיקרופיברילים מתארגנים למבנים דמויי סרט, ויוצרים מטריצה תלת-ממדית של ננו-צלולוזה.

ככל שמיוצר יותר ננוצלולוז, הוא מצטבר בממשק האוויר-נוזל, ומתעבה לפליקלים ג'לטיניים המעוצבים לצורת הבאר.

קצרו את הפליקלים, ודגרו אותם בתמיסה אלקלית כדי לפרק את תאי החיידקים, ואז הסרו את המדיום שנותר.

שטוף את הפליקלים שוב ושוב במים כדי להסיר כל תמיסה בסיסית שנותרה. אחסן את הפליקלים במים כדי למנוע התייבשות. לאחר מכן, מעטאים אותם באדים כדי להבטיח את הסטריליות לשימושים נוספים.

העבר שני מיליליטרים של מדיום תרבית נוזלי לכל באר של צלחת תרבית רקמה בת 24 בארות. קחו שתי מושבות עם מחט חיסון מהצלחות המחוסנות בקצב, והניחו אותן בבאר הראשונה של צלחת תרבית הרקמה. חזור על אותו הליך עבור 23 הבארות הנותרות.

דגרו את צלחת תרבית הרקמה בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס למשך שבעה ימים. זה יניב סך של 24 פליקלים BNC בקוטר של 16 מ"מ ועובי של כ-2 עד 3 מ"מ. אספו את כדורי ה-BNC ממדיית הגידול וחיטאו אותם ב-200 מיליליטר של תמיסת נתרן הידרוקסיד עם אחוז אחד למשך שעה בטמפרטורה של 50 מעלות צלזיוס כדי להסיר את כל שאריות ה-G. xylinus.

השליכו את התמיסה והוסיפו 200 מיליליטר של תמיסת נתרן הידרוקסיד טרי שהוכנה באחוז אחד. חוזרים על אותו תהליך פעם נוספת או עד שהפליקלים של BNC בתמיסה יקבלו מראה שקוף. שטוף את הכדורים של BNC במים שלוש פעמים, ואחסן אותם במים טהורים בטמפרטורת החדר.

ודא שהפליקלים של BNC שקועים לחלוטין במים ואינם מאפשרים להם להתייבש בכל עת. לאחר מכן, אוטוקלב לגלי ה-BNC בטמפרטורה של 121 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.