בידוד אנדוספורות מדגימה סביבתית באמצעות ניתוק ממוקד של תאים וגטטיביים

קחו דגימה סביבתית המכילה תאים וגטטיביים ואנדוספורים של חיידק יוצר אנדונספורים, יחד עם חיידקים נוספים.

לאנדוספורות יש שכבת הגנה שעוזרת להם לשרוד בתנאים קשים.

באמצעות יחידת סינון ואקום, מסננים את הדגימה כדי ללכוד את התאים והאנדוספורות על ממברנה.

מניחים את הממברנה בצלחת וחתכו אותה לחתיכות קטנות.

העבר את החלקים לצינור, הוסיף בופר, וערבב את הצינור כדי לשחרר את התאים והאנדוספורים.

דגרו עם ערבוב בטמפרטורה גבוהה כדי להחליש את מבני התאים הצמחיים מבלי לפגוע באנדוספורות.

מקררים את הדגימה, מוסיפים ליזוזים ודגרו עם ערבוב. ליזוזים מפריע לדופן התא של התאים הצמחיים, וגורם לקרע שלהם.

הוסיפו הידרוקסיד נתרן ודטרגנה, ודוגרו כדי לפרוק את המקרומולקולות והפסולת התאיות תוך שמירה על האנדוספוגרים העמידים.

סנן את הדגימה כדי לבודד את האנדוספוגרים. שטפו את האנדוספורות כדי להסיר מיותרים, והכינו אותם לניתוח נוסף.

לאחר שיחידת הסינון ומשאבת הוואקום הוכנו בהתאם לפרוטוקול הטקסט, השתמשו במלקחיים סטריליים עם להבה באתנול כדי להוסיף ממברנת ניטרוצלולוזה סטרילית ליחידת הסינון. הוסף חצי מדגימת הסופרנטנט שהוכנה זה עתה ליחידת הסינון של הממברנה והשתמש במשאבת הוואקום כדי לאסוף את התאים על הממברנה. כאשר הנוזל עבר במלואו דרך המסנן, עצור את משאבת הוואקום.

השתמשו במלקחיים מעוקרים כדי להסיר בזהירות את הממברנה ולשים אותה בצלחת פטרי סטרילית. ע