הגברה איזותרמית בתיווך לולאה לזיהוי גנים חיידקיים

קחו תערובת מאסטר המכילה פולימראז DNA המזיז את הגדלים, נוקלאוטידים וצבע קושר DNA דו-גדילי להגברה איזותרמית מתווכת לולאה או LAMP.

הוסף פריימרים המכילים רצף משלים הפוך ספציפי לגן החיידקי המטרה.

מפזר את המיקס הראשי לתוך הצינורות.

הוסיפו דגימות המכילות תבניות DNA חיידקי לצינורות.

שים את הצינורות בתוך כלי LAMP (LAMP instrument).

דה-נאטורציה ראשונית מאפשרת לפריימר להיקשר ל-DNA המטרה.

כאשר ה-DNA פולימראז שמזיז את הגדיל מתחיל לסנתז גדיל חדש, הוא מזיז את הגדיל הקיים, ומבטל את הצורך במחזור תרמי.

המכפלה המוגברת יוצרת מבנה לולאתי בשל ההתאמה ההפוכה-משלמת.

מבנה זה מכיל מספר אתרי התחלה למחזור הבא, ומקל על הגברה מעריכית של DNA היעד.

הצבע נקשר ל-DNA המוגבר ופולט פלואורסצנציה.

נטר את הפלואורסצנציה בזמן אמת כדי לזהות את נוכחות הגן החיידקי המטרה בדגימות.

הפרדו פיזית את האזורים המשמשים להכנת תערובת המאסטר של LAMP והוספת תבניות ה-DNA.

נקה את משטחי העבודה עם איזופרופנול ותמיסה לפירוק DNA ו-DNase. לאחר מכן, נקה את הפיפטות ומחזיקי הפס של הצינורות. הפשיר את תערובת המאסטר איזותרמית, תערובת פריימר 10X, מים בדרגת מולקולרי, DNA בקרה חיובית ותבניות DNA בטמפרטורת החדר.

הפעל את מכשיר ה-LAMP והזן את המידע הרלוונטי לדוגמה. הכינו את תערובת המאסטר של LAMP לפי הוראות כתב היד, הפעילו אותה בוורטקס וצנטריפוגה לזמן קצר, והפזרו 23 מיקרול