הכנת דגימות מיקסוקוקוס קסנתוס להדמיה של תאים חיים

התחילו בתרבית של Myxococcus xanthus, חיידק קרקע שגדל לאט.

החסן מושבה לתוך מדיום עם אנטיביוטיקה.

התאים הונדסו לעמוד בפני האנטיביוטיקה, כדי להבטיח שרק החיידקים הרצויים ישרדו.

העבר את המתלה לבקבוקון גדול יותר המכיל את המדיום ודוגר עם ניעור כדי לקדם צמיחה מיטבית.

קחו כיסוי שמותקן על מסגרת מתכת, שמספקת תמיכה מכנית במהלך ההדמיה.

מפזרים עליו את תרבית החיידקים, ואז מוסיפים מיקרוספירות פלואורסצנטיות שישמשו כנקודות ייחוס ליישור תמונה תוך כדי רכישת מספר תמונות.

הנח פד אגרוז מחומם מראש המכיל את המדיום, ואז שכב עליו כיסוי לשמירה על ההידרציה.

דגרו כדי לאפשר לתאים להיצמד לכרית האגרוז.

הפד מספק חומרים מזינים לתאים ומאפשר הדמיה תאית חיים ארוכת טווח של תהליכים תאיים במהלך התרבות בחיידק שגדל לאט.

כדי להתחיל, תלו מחדש מושבה אחת של M. xanthus ב-500 מיקרוליטר של 1% CTT, בתוספת אנטיביוטיקה, בצינור סטרילי והעבירו את כל השניים לבקבוק Erlenmeyer בנפח 50 מיליליטר המכיל חמישה מיליליטר של 1% CTT. הכינו תמיסת מיקרוסקופיה של 1% אגרוז המכילה 0.2% CTT על ידי ערבוב גרם אחד של אגרוז עם 80 מיליליטר של בופר TPM ו-20 מיליליטר של חומר CTT 1%. חממו את התמיסה במיקרוגל עד שהאגרוז מותך.

מלאו צלחת פטרי בכ-60 מיליליטר של אגרוז מותך ותנו לה להתקרר לטמפרטורת החדר. חממו מראש את פד האגרוז בטמפרטורה של 32 מעלות צלזיוס לפחות 15 דקות לפני השימוש. לאחר מכן, הנח כיסוי זכוכית סטרילי על מסגרת פלסטיק או מתכת שיש לה חור במרכז. אחר כך השתמש בסרט דבק כדי להצמיד את הכיסוי למסגרת.

הוסיפו 10 עד 20 מיקרוליטר של תאי M. xanthus שגדלו באופן אקספוננציאלי על הכיסוי. כדי להוסיף מיקרוספירות פלואורסצנטיות כסמנים פידוציאליים של התאים, השתמשו בבופר TPM כדי לדלל את המיקרוספירות ל-1:100. נער היטב את תליית החרוזים והוסף חמישה עד עשרה מיקרוליטרים לתאים.

מהפד הגדול והמחומם מראש עם 1% אגרוז, חתך כרית קטנה בגודל של כיסוי הכיסוי והנח אותה מעל התאים. לאחר מכן מניחים כיסוי על גבי הכרית כדי למנוע אידוי ולשמור על תאים בסביבה לחה. דגרו את דגימת המיקרוסקופיה בטמפרטורה של 32 מעלות צלזיוס למשך 15 עד 20 דקות כדי לאפשר לתאים להיצמד לתחתית משטח האגרוז לפני הקלטות מיקרוסקופיות בזמן-לאפס.