אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:14 דק׳ • November 28th, 2025
התחילו במושבות של חיידק פתוגני שגדל על מדיום אגר עשיר בחומרים מזינים.
בחרו מושבה אחת, שמבטיחה אוכלוסייה הומוגנית גנטית של תאי חיידק ומפחית שונות במהלך הגנוטיפינג.
באמצעות לולאת חיסון סטרילית, העבירו את המושבה הנבחרת למים אולטרה-טהורים כדי למזער את הסיכון להכניס מזהמים לדגימה.
מערבל את השעון כדי לשבור את המושבה ולפזר את תאי החיידקים באופן אחיד.
לאחר מכן, חממו את התלייה כדי לשבש את מעטפת התא החיידקית, הכוללת את הממברנה החיצונית, שכבת הפפטידוגליקן והממברנה הפנימית.
דבר זה גורם לתאי החיידקים לעבור ולשחרר תכולת תוך-תאית, כולל DNA גנומי, אל תוך המים.
צנטריפוגות את המתלה במהירות גבוהה כדי להפריד פסולת תאית מה-DNA הגנומי.
העבר את הסופרנטנט לצינור חדש ליישום גנוטיפינג במורד הזרם.
כדי להתחיל, השתמש בלולאות חיסון סטריליות כדי לזרוע תרביות טהורות של ירסיניה רוקרי על כל סוג אגר מתאים על צלחות פטרי. דגרו בטמפרטורה של 22 מעלות צלזיוס ליום עד יומיים או ב-15 מעלות צלזיוס למשך שלושה עד ארבעה ימים. לאחר מכן, באמצעות לולאות חיסון, בחרו מושבה מייצגת אחת מכל צלחת פטרי והעבירו לצינורות צנטריפוגה בנפח 1.5 מיליליטר, המכילות 50 מיקרוליטר של מים מטוהרים במיוחד להשעיה.
מערבולת קצרה ודגרה במשך שבע דקות על בלוק חימום בטמפרטורה של 100 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, צנטריפוגה ב-16,000 גרם למשך שלוש דקות והשתמשו בפיפטה כדי להעביר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים