בידוד חיידקים מותאמים ללחץ באמצעות סלקציה של מושבה בודדת

קחו תרבית חיידקים שגודלה תחת תנאי לחץ לתקופה ממושכת.

הלחץ ארוך הטווח גורם למוטציות ספונטניות, ברירה טבעית והתרבות חיידקים המותאמים ללחץ.

כדי לבודד חיידקים אלו, יש ללחוץ נפח קטן של התרבית על פלטת אגר המכילה את אותו גורם לחץ ולדגור.

גורם הלחץ מבטיח את צמיחתם של מושבות חיידקים המותאמות ללחץ.

בחר מושבה אחת לשמירה על טוהר גנטי ולחסן מדיום נוזלי בגורם הלחץ.

דגרו עם ניעור כדי להקל על צמיחת חיידקים המותאמים ללחץ.

השתמש בנפח קטן של התרבות כדי לחסן מדיה טרייה בגורם הלחץ.

במקביל, לחסן מדיום אחר המכיל את הגורם הלחץ בחיידקים מסוג בר או לא מותאמים ללחץ.

מדדו את הספיגה במרווחים קבועים כאינדיקטור לצמיחת חיידקים.

השווה את פרופיל הגידול כדי להבטיח בידוד מוצלח של חיידקים המותאמים ללחץ.

הכינו פלטת אגר 1.6% מדיום המכיל את אותו גורם לחץ ובריכוז זהה לזה שבמדיום. צלחת של 0.1 מיליליטר של תרבית היציאה מהכימוסטט ודגרה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 16 שעות. לאחר הדגירה, קטף מושבות בודדות מהצלחת באמצעות קיסם סטרילי וחסן אותן במבחנות, בנפח 15 מיליליטר, המכילות את אותו גורם לחץ ובריכוז בינוני כמו בכימוסטט.

דגרו שש שעות. העבר מיליליטר אחד ממרק התרבית לבקבוק ארלנמאייר בנפח 250 מיליליטר המכיל 50 מיליליטר מדיום. קצור 0.5 מיליליטר של מרק התרבית כל שעה ומדד את הצפיפות האופטית ב-600 ננומטר.

השוו את קצב הגדילה של הזן המותאם לזה של הזן הפראי בהתחשב בגורם הלחץ