$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
קחו דגימת מי ים המכילה מיקרובים מגוונים, כולל חיידקים שמפריקים מזהמים סביבתיים.
מדלל את הדגימה באופן סדרתי כדי להפחית צפיפות מיקרוביאלית וצלח אותה על מדיום תזונתי.
לאחר הדגירה, בחרו מושבות מורפולוגיות שונות, שעדיין עשויות להכיל סוגי חיידקים גנטית ומטבוליים מגוונים.
רצף כל מושבה שנבחרת כדי לפזר תאים בודדים ולדגיר.
כל תא יוצר מושבה, המייצגת בידוד חיידקי טהור גנטית עם פרופיל מטבולי מובחן.
החסן כל איזולד לתוך מדיום גדילה ודגר כדי להגדיל את הביומאסה.
צנטריפוגה את התרבית, זרקו את הסופרנטנט, ושוטפים עם בופר כדי להסיר את המדיום הנותר.
החזירו את התאים בבופר והחריכו אותם לתוך מדיום ברירה המכיל EE2, מזהם סביבתי.
כמקור הפחמן היחיד בתווך, EE2 בוחר חיידקים שיכולים למטבוליזם אותו לאנרגיה ולצמיחה.
עכירות בתווך מצביעה על גדילה חיידקית, המאשרת את בידוד הבידוד החיידקי המפרק את המזהמים.
כדי לבחור חיידקים, יש לבצע דילול סדרתי עד 10 עד מינוס תשע בתמיסת מלח סטרילית לדגימות אלמוגים ועד 10 עד מינוס שש לדגימות מים. פיפטה מדללת למעלה ולמטה חמש פעמים לפני שהיא מבטלת את הקצה.
ואז, מערבולות כל אחד. מערבולת את הדגימות למשך חמש שניות בכל פעם לפני ביצוע הדילול הסדרתי הבא. פיפט 100 מיקרוליטר מכל דילול על צלחות פטרי המכילות 3% נתרן כלוריד ליזוגני מרק אגר מדיום וצלחת.
דגרו את הצלחות למשך יום עד שלושה בטמפרטורה הרצויה, למשל 26 מעלות צלזיוס. בדוק את הלוחיות פעם ביום. בחר ובודד את המושבות המציגות מורפולוגיות גדילה מובחנות על לוחות חדשים באמצעות טכניקת לוחות הפסים.
חזור על השלב הזה כמה פעמים שצריך כדי לגדול מושבות טהורות על הלוחות. אחסן את הבודדים בארבע מעלות צלזיוס או בגליצרול כפי שמתואר בכתב היד. כדי לבצע בדיקת יכולת פירוק EE2, בחר מושבה אחת מהפלטות הטריות והחסן בשני מיליליטר של מדיום LB סטרילי בצינור.
אם מדובר במאגר גליצרול, קח 10 מיקרוליטר של חיידקי גליצרול ומרח על פלטות LB אגר. דגרו בטמפרטורה של 24 עד 28 מעלות צלזיוס במהלך הלילה כדי לגדול מושבות בודדות. הניחו את הצינור המכיל LB בינוני בנטייה תחת ערבוב קבוע של 150 פעמים גרם בטמפרטורה של 24 עד 28 מעלות צלזיוס במהלך הלילה.
לאחר צמיחת חיידקים, יש לפלוט את התאים על ידי צנטריפוגה ב-8,000 פעמים גרם למשך שמונה דקות בטמפרטורת החדר. זרוק את הסופרנטנט. כדי לשטוף את מרק ה-LB שנותר, הוסיפו שני מיליליטר מים מלוחים כדי להחזיר את התאים.
חזור על הכביסה פעמיים כדי לוודא שאין סימני פחמן. החרינו את התאים השטופים והמושבים במדיום תרבית מינימלי של בושנל האס המכיל EE2 כמקור הפחמן היחיד. העריך את התפתחות החיידקים לפי צפיפות אופטית ב-600 ננומטר ויחידות יצירת מושבות על מדיום אגר LB לאחר 16 עד 72 שעות של דגירות.