סינון חיידקים ימיים לבידוד זנים מזהמים

קחו דגימת מי ים המכילה מיקרובים מגוונים, כולל חיידקים שמפריקים מזהמים סביבתיים.

מדלל את הדגימה באופן סדרתי כדי להפחית צפיפות מיקרוביאלית וצלח אותה על מדיום תזונתי.

לאחר הדגירה, בחרו מושבות מורפולוגיות שונות, שעדיין עשויות להכיל סוגי חיידקים גנטית ומטבוליים מגוונים.

רצף כל מושבה שנבחרת כדי לפזר תאים בודדים ולדגיר.

כל תא יוצר מושבה, המייצגת בידוד חיידקי טהור גנטית עם פרופיל מטבולי מובחן.

החסן כל איזולד לתוך מדיום גדילה ודגר כדי להגדיל את הביומאסה.

צנטריפוגה את התרבית, זרקו את הסופרנטנט, ושוטפים עם בופר כדי להסיר את המדיום הנותר.

החזירו את התאים בבופר והחריכו אותם לתוך מדיום ברירה המכיל EE2, מזהם סביבתי.

כמקור הפחמן היחיד בתווך, EE2 בוחר חיידקים שיכולים למטבוליזם אותו לאנרגיה ולצמיחה.

עכירות בתווך מצביעה על גדילה חיידקית, המאשרת את בידוד הבידוד החיידקי המפרק את המזהמים.

כדי לבחור חיידקים, יש לבצע דילול סדרתי עד 10 עד מינוס תשע בתמיסת מלח סטרילית לדגימות אלמוגים ועד 10 עד מינוס שש לדגימות מים. פיפטה מדללת למעלה ולמטה חמש פעמים לפני שהיא מבטלת את הקצה.

ואז, מערבולות כל אחד. מערבולת את הדגימות למשך חמש שניות בכל פעם לפני ביצוע הדילול הסדרתי הבא. פיפט 100 מיקרוליטר מכל דילול על צלחות פטרי המכילות 3% נתרן כלוריד ליזוגני מרק אגר מדיום וצלחת.

דגרו את הצלחות למשך יום עד שלושה בטמפרטורה הרצויה, למשל 26 מע