העשרה סלקטיבית ובידוד של חיידקים ימיים מפרקים נפט מדגימות מי ים

התחל בדגימת מי ים המכילה קהילות מיקרוביאליות מגוונות, כולל חיידקים המסוגלים לפרק פחמימנים.

לבצע דילול סדרתי של הדגימה במלח כדי להפחית צפיפות מיקרוביאלית.

הוסיפו נפט גולמי למים מזוקקים סטריליים וערבבו את התערובת כדי להמיס חלקית את רכיבי הפחמימנים בשמן.

אפשר לתערובת לשקוע, ולהפריד אותה לחלקי שמן מסיסים במים ובלתי מסיסים במים.

הכינו לוחות אגר סלקטיביים תוך שימוש בכל שבר שמן כמקור הפחמן היחיד להעשיר עבור חיידקים שמפרקים פחמימנים מסיסים או הידרופוביים.

הנח את דגימות מי הים המדוללות על המדיה הסלקטיבית ודגור בטמפרטורת הסביבה.

מושבות שמתפתחות מסתמכות על אנזימים כמו הידרוקסילאז ודיאוקסיגנזים כדי למטבוליזם פחמימנים.

בחר מושבות מורפולוגיות שונות ומשדר אותן על מדיום טרי המכיל את אותו חלק שמן כדי לקבל תרביות טהורות של חיידקים מפריקי פחמימנים.

שיטה זו מאפשרת בידוד סלקטיבי של חיידקים ימיים המפרקים שמן.

כדי להכין מדיום מינימלי המכיל חלק מסיס בשמן-מים וחלק בלתי מסיס של שמן-מים כמקור הפחמן היחיד, יש להוסיף 1-2% נפט גולמי ל-500 מיליליטר מים מזוקקים סטריליים בבקבוק סינון המכיל שסתום בתחתית. שמור על הבקבוקון תחת ערבוב מתמיד בטמפרטורה של 24 עד 28 מעלות צלזיוס ב-150 פעמים גרם למשך 48 שעות. לאחר מכן, מניחים את הבקבוק על משטח יציב והמתינו 10 עד 20 דקות כדי לאפשר לחלק המסיס והבלתי מסיס להיפרד.

לאחר מכן פתחו את בקבוק המסנן התחתון כדי להעביר את החלק המסיס בשמן-מים לבקבוק סטרילי חדש, תוך שמירה על החלק הבלתי מסיס של שמן-מים. לאחר מכן הכינו שתי בקבוקי אגר בושנל האס מינימום בינוני. אוטוקלאב.

שילוב עם החלק המסיס בשמן-מים כמקור הפחמן היחיד ליצירת 500 מיליליטר של מדיום אגר. עשו אותו דבר עם החלק הבלתי מסיס של שמן-מים והעבירו כ-25 מיליליטר מכל מדיום לצלחות פטרי נפרדות. כדי לבודד חיידקים שמפריקי שמן, יש להשתמש מחדש בדגימות מדוללות בעבר ולפיפטה של 100 מיקרוליטר מכל דילול על צלחות פטרי המכילות מדיום אגר וצלחן אותן.

זכור לשמור שליטה שלילית על הלוחות שלך. דגרו את הכלים למשך יום עד שלושה בטמפרטורה הרצויה וחזרו על הליכי הבידוד כפי שהיו קודם.