אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:12 דק׳ • November 28th, 2025
התחילו בצינור הממוקם בתוך תא אנאירובי המכיל מדיום עשיר בחומרים מזינים וסיב מותס מראש.
התנאים חסרי החמצן בתוך הצינור מחקים את הסביבה האנאירובית של המעי הגס האנושי.
לאחר מכן, מוסיפים לצינור דגימת צואה מדוללת והומוגנית המכילה מיקרובים במעי ודגרו אותה.
הפוך את הצינור באופן קבוע כדי לערבב את המיקרובים עם הסיבים.
במהלך הדגירה, המיקרובים מטבוליזם אנאירובי ותססתי את הסיבים, מייצרים חומצות שומן קצרות שרשרת ומטבוליטים נוספים, מה שמורידים את ה-pH של התווך.
אספו אליקווטים מתערובת התסיסה במרווחים קבועים כדי לעקוב אחרי ייצור מטבוליטים ולבדוק את ה-pH שלהם.
צנטריפוגות את האליקוטים בטמפרטורות נמוכות כדי להפריד את הביומסה המיקרוביאלית לכדור.
העבר את הסופרנטנט המכיל את המטבוליטים וחומצות שומן קצרות השרשרת לצינור טרי.
הקפיאו גם את הביומסה המיקרוביאלית וגם את הסופרנטנט בחנקן נוזלי.
לבסוף, אחסן את הדגימות בטמפרטורה נמוכה לניתוח נוסף.
שמרו על הצינורות המחוסנים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בתוך התא האנאירובי, והפכו בעדינות פעם בשעה כדי להחזיר את הסיבים והאינקולום. לאחר 3, 6, 9 או 24 שעות, הוציאו את הכמות הנכונה של מדיום מותסס, וצנטריפוגות את הדגימות ב-14,000 פעמים גרם למשך 10 דקות בארבע מעלות צלזיוס.
מקפיאים מיד את הסופרנטנט והכדור בחנקן נוזלי, ואז לאחר הקפאה חדה, מאחסנים את הסופרנטנט לניתוח חומצות שומן קצרות שרשרת, ואת הכדור לניתוח מיקרוביום, בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס.