JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:51 דק' • November 28th, 2025
קחו לדוגמה את התרבית של חיידק מהונדס גנטית להכיל פלסמיד שמבטא חלבון פלואורסצנטי מפריש ומעניק עמידות לאנטיביוטיקה.
החסן אותו במדיום המכיל את האנטיביוטיקה ודוגר עם ניעור כדי לעודד צמיחת חיידקים.
האנטיביוטיקה מבטיחה שרק התאים השומרים את הפלסמיד יוכלו להתרבות.
כאשר התרבות מגיעה לצפיפות הרצויה, העבר אותה למערכת אוטומטית לטיפול בנוזלים.
צלחת באר עמוקה מכילה ריכוזים משתנים של חומרים מזינים חיוניים, המוזרמים לפלטת מיקרוטיטר ליצירת פורמולות מדיה מובחנות.
החסן כל באר בצלחת בתרבות החיידקים.
אטום את הפלטה והניח אותו בתוך מיקרוביוריאקטור, ששומר על טמפרטורה ואוורור אחידים.
הנוסחאות השונות מובילות לשינויים בצמיחת חיידקים ובהפרשת חלבון פלואורסצנטי.
חיישן אופטי במכשיר מודד צפיפות תאים ופלואורסצנציה, ומאפשר השוואה בין צמיחת חיידקים וייצור חלבונים פלואורסצנטיים בין נוסחאות המדיה.
סטריליזציה של לוחות באר עמוקים לאחסון תמיסת המלאי על שולחן עבודה על ידי ניקוי הלוחות ב-70 אחוז אתנול ולאחר מכן ייבוש במכסה זרימה למינרי. התחל את תרבית הזרעים על ידי חיסון 50 מיליליטר של מדיום BHI המכיל 25 מיליגרם לליטר של קאנמיצין עם אליקווט אחד מהמאגר התאים הפעיל. הניחו את כל כלי המעבדה הדרושים על שולחן העבודה הרובוטי ושפכו תמיסות מלאי לכלי המעבדה המתאימים.
לאחר מכן, התחל את זרימת העבודה הרובוטית להכנת המדיה כדי שהשלב האחרון, שהוא החיסון, יושג בזמן לתחילת תרבות הזרעים. דגום את תרבית הזרעים לאחר כשעתיים למעקב אחר הצמיחה על ידי מדידת צפיפות אופטית ב-600 ננומטר או OD600. המשך לעקוב אחרי הצמיחה בכל שעה.
לאחר כחמש שעות, התרבית מגיעהל-OD 600 בין שלוש לארבע, ומשמשת לחיסון התרביות המרכזיות. הנח את תרבית הזרעים על שולחן העבודה של מטפל הנוזלים והמשך בפרוטוקול הכנת המדיה. אטום את לוחות המיקרוטיטר של הגידול לאחר החיסון.
לאחר מכן, הנח את MTP הגידול האטום במכשיר הביולקטור. ואז, תתחיל את פרוטוקול הטיפוח המוגדר מראש.