JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:35 דק' • November 28th, 2025
התחילו בהחדרת לולאה של זן ציאנובקטרי על מדיום גדילה. דגרו כדי לאפשר לתאים לגדול לצפיפות הרצויה.
שטפו את התאים בצנטריפוגציה והשליכו את הסופרנטנט המכיל מטבוליטים ושאריות לכלוך.
החזירו את הכדור לתלייה בנפח קטן של מדיום גדילה ליצירת תלייה מרוכזת.
מערבבים אליקו של תחום זה עם גליצרול, מגן קירור שמייצב את הממברנה ומונע היווצרות גבישי קרח במהלך ההקפאה.
לעוד אחד, הוסיפו דימתיל סולפוקסיד, מגן קריופרוטקטן החודר לתאים ומעכב את יצירת גרעין הקרח.
אחסן את הדגימות בטמפרטורות נמוכות, שבהן הפעילות המטבולית נעצרת והתאים נשארים חיוניים לתקופות ממושכות.
כדי להתעורר, גרדו כמות קטנה מהביומסה הקפואה על פלטת אגר ללא אנטיביוטיקה ופס כדי להפחית לחץ ולתמוך בהתאוששות הדרגתית.
שיטה זו מאפשרת שימור והחייאה ארוכי טווח של זני ציאנובקטריה למחקרים עתידיים.
כדי לאחסן את הזנים לטווח ארוך, יש להקים תרבית חדשה של הזן על ידי חיסון לולאה מלאה בתאים לתוך 30 עד 50 מיליליטר של מדיום BG11. הגדל את התרבית במשך שלושה עד ארבעה ימים ל-OD750 השווה ל-0.4 עד 0.7.
לאחר שימוש ב-BG11 לשטיפת התאים פעם אחת, החזירו את הכדור למרחק של כ-2 מיליליטר של BG11. הוסיפו 0.8 מיליליטר מהתאים המרוכזים לצינור אחד. ואז מוסיפים 0.2 מיליליטר של 80% גליצרול סטרילי עם סינון.
לצינור נוסף, הוסיפו 0.93 מיליליטר של תאים מרוכזים ו-0.07 מיליטר DMSO. אחסן את שני הצינורות בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס. כדי להחיות את הזנים, הסר את הצינור והשתמש בקיסם קהה כדי לגרד כמה תאים על פלטת אגר ללא אנטיביוטיקה. ואז להשתמש בלולאה סטרילית כדי לצאת כרגיל.