כימות דיכוי ביופילם המושר על ידי אנזימים בחיידקים פתוגניים

קחו מיקרופלטה המכילה בארות בקרה וטיפול, שכל אחת מהן מחוסנת בחיידק פתוגני יוצר ביופילם.

בארות הטיפול מכילות אנזים שמפריע להיווצרות ביופילם.

דגרו בתנאים מיקרו-אנאירוביים ליצירת סביבה דלת חמצן. זה מקדם הפרשת מולקולות איתות חיידקיות המתווכות הידבקות פני השטח. בבארות הטיפול, האנזים מפרק את המולקולות הללו, ובכך מפחית את ההיצמדות של חיידקים.

שטוף את הבארות כדי להסיר תאים לא דביקים למים.

הכניסו מדיום טרי ודגרו. החיידקים הדבוקים מתרבים ומפרישים חומרים פולימריים חוץ-תאיים, היוצרים את מטריצת הביופילם.

הסר את המדיום ושטוף את הבארות.

הוסיפו צבע קטיוני ודגרו כדי לאפשר קשירה לרכיבי ביופילם טעונים שלילית.

שטוף כדי להסיר צבע שלא קשור.

דגרו עם ממס תחת ערבוב כדי לשחרר את הצבע הקשור לתמיסה.

מדוד את צפיפות האופט או OD כדי לכמת את הביומסה של הביופילם.

רמת מנת חמצון נמוך יותר בבארות הטיפול משקפת ירידה ביצירת ביופילם, הנובעת מפגיעה בהיצמדות התא הראשונית.

כדי להתחיל, גדל תרבית של 5 מיליליטר של A.baumannii S1 ב-LB בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס במדגם רועד למשך 16 שעות.

כוון את התרבות ל-OD₆₀₀ של 0.8. לאחר מכן השתמש ב-LB טרי המכיל 4 מיליגרם לכל מיליליטר של אנזים GKL מטוהר כדי לדלל את התרבית 1 עד 100. ולהוסיף 100 מיקרוליטר לבארות של לוח עם 96 בארות.

השתמשו במכסים כדי לכסות את הצלחות, והניחו אותן במיכל פלסטיק בנפח 10 ליטר. אט