JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:15 דק' • March 31st, 2026
התחל עם שתילי תירס שגדלים בתנאים מבוקרים כדי לשמש כמארח.
לאחר מכן, קחו את Agrobacterium tumefaciens, חיידק צמחי פתוגני.
החיידקים המהונדסים נושאים מבנה T-DNA המקודד גנום ויראלי רקומביננטי. הגנום הזה מכיל קטע גן שהוכנס שנועד להשתיק גן תירס יעד.
הזרקו את החיידקים ממש מעל לצומת הקולאופטילר, החלק התחתון בצמח, עד שההתלייה ממלאת את הקולאופטיל, ומבטיחים את ההעברה לרקמות הפנימיות.
באתר ההזרקה, החיידקים מעבירים את ה-T-DNA הנושא את הגנום הוויראלי לתאי תירס, שם הוא מועתק ל-RNA ויראלי שנכנס לציטופלזמה.
ה-RNA משכפל ומפעיל ייצור חלבון ויראלי, ויוצר חלקיקים ויראליים חדשים המתפשטים באופן מערכתי כדי ליצור זיהום.
ה-RNA הוויראלי הנושא את קטע הגן הרצוי מפעיל את מנגנון ההתערבות של ה-RNA בצמח, מפרק mRNA ספציפי של תירס ומשתיק את הגן המטרה.
כתוצאה מכך, שינויים נראים לעין בפנוטיפים המווסתים על ידי הגן המטרה ככל שהצמחים הנגועים גדלים, כגון היווצרות נגעים נמקיים, מה שמאשר השתקת גנים מוצלחת.
השתמשו בשתילי תירס בני 4 עד 7 ימים להזרקת אגרובקטריום. הרכיבו את המזרק והמחט. הזרקו בעדינות את ההתנגדות החיידקית 2-3 מילימטרים מעל הבלוטת הקולאופטילורי, עד שהיא ממלאת את הקולאופטיל או שהיא נראית בגלגול, בהתאם לשלב הגדילה של הצמחים.
להזריק את כל השתילים ולהחליף את המזרק והמחטים להזרקת כל מבנה. אשר זיהום פנוטיפי על ידי תצפית על נגעים שנגרמו מהשתקת גני הבקרה, מחקה 22 לנגע, או פיטואן דסאטוראז על העלים.