מודל המעי במבחנה להערכת הידבקות ואינטרנליזציה של חיידקים

התחילו עם תוספת Transwell המכילה קו-קולטורה של תאים אפיתליים ותאים דמויי גביע.

תאי אפיתל יוצרים חיבורים צמודים, בעוד שתאים דמויי גביע מייצרים ריר, המשכפלים את מחסום האפיתל המעי בתוך החיים.

קחו תלייה של קהילת חיידקי הפה שטופלה בנוזל מעי מדומה כדי לדמות עיכול במעי הדק.

החלף את המדיה בתא העליון במתלה חיידקים.

דגרו עם ניעור כדי להקל על היצמדות חיידקים והפנמה.

אסוף את המדיה מהתא העליון המכיל חיידקים שאינם דבקים לבדיקות חיוניות נוספות.

הוסיפו תמיסה הממיסה לריר ודגרו את הריר כדי להמיס את הריר ולשחרר את החיידקים הדבוקים שדבקו.

אסוף את הפתרון לניתוח נוסף של חיוניות והיצמדות חיידקים.

שטפו את התאים עם בופר והוסיפו חומר ניקוי כדי להוציא אותם.

אסוף את מתלי התא.

מערבל את השעון כדי להפריד את התאים ולשחרר את החיידקים הפנימיים.

צנטריפוגה ואספו בנפרד את הסופרנטנט ואת הפסולת התאית להמשך ניתוח.

לאחר שטיפה והתאמת צפיפות התאים של עיכול המעי הדק בהתאם לפרוטוקול הטקסט, הסרת המדיום האפיקלי ממערכת הטרנסוול, והוסף 1.5 מיליליטר של תלייה חיידקית.

קו-קולטורציה של המערכת בתנאי תרבית תאים כלליים למשך שעתיים. הוסף 0.5 מיליליטר של 10 מילימולר n-אצטילציסטאין ב-HBSS כדי להמיס את הריר שנוצר על ידי HT29-MTX ולשחזר את החיידקים שנדבקו.

דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה תחת ערבוב. שחזרו את ה-NAC-HBSS בצינור מיקרוצנטריפוגה, והשתמשו ב-1 מיליליטר DPBS כדי לשטוף את התאים פעמיים. הוסיפו 0.5 מיליליטר של 0.5% טריטון X-100 מעל השכבות המונולריות, והפרעו לתאים על ידי פיפטינג.

ואז תחזיר במהירות את הנוזל במערבולת למשך דקה. מהירות היא קריטית כדי להימנע מפגיעה בתאי החיידקים עם הדטרגנה. נתח את הדגימות לפי פרוטוקול הטקסט.