אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 4:12 דק׳ • August 31st, 2026
התחילו עם הפטוציטים שגודלו בצלחת מצופה קולגן.
החדירו רכיב טרנספקציה המקומפלס עם שני פלסמידים: אחד הנושא גנום של נגיף ההפטיס B (HBV) שעבר שינוי, והשני המקודד את החלבונים המבניים של הנגיף.
דגרו את התאים כדי לאפשר את כניסת הפלסמידים. בתוך התא, הגנים הוויראליים מתבטאים כדי לייצר חלבונים מבניים וגנום HBV משונה, המורכבים יחד ליצירת חלקיקי HBV רקומביננטיים.
החליפו את המצע והדגרירו כדי לתמוך בייצור ובשחרור של חלקי הנגיף.
אספו את המצע וסובבו בצנטריפוגה כדי להשקיע את השאריות.
אספו את supernatant וסננו אותו כדי להסיר שאריות פסדtestimonials.
לאחר מכן, הוסיפו polyethylene glycol ו-sodium chloride כדי להשקיע את החלקיקים הויראליים.
בצעו צנטריפוגה להשקעת התוכן. המיסו את המשקע בבופר ובצעו ספין-דאון להסרת השאריות. לאחר מכן, שכבו את התוצאה על כרית סוכרוז.
בצע אולטרה-צנטריפוגציה כדי לשקיע את החלקיקים הויראליים דרך הכרית.
הסר את העל-נוזל (supernatant) ותלה את המשקע במצע גידול.
סננו את התוך וסננו את ה-HBV הרקומביננטי המנוקה בטמפרטורה נמוכה לצורך ניתוחים המשכיים.
לאחר הכנת מצע תרבית התאים, ביום שלפני הטרנספקציה, העבירו 4x10^6 תאי HepG2 בתוך המצע לצלוחית בקוטינג של קולגן בקוטר 10 ס"מ. דגרו את התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באינקובטור לח עם 5% CO2.2 אינקובטור. באמצעות חומר טרנספקציה, בהתאם להוראות היצרן, בצע טרנס
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים