JoVE Encyclopedia of Experiments
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:29 דק' • August 31st, 2026
קחו פשפשים שלב ראשון (early-instar), הרגישים לזיהום נגיפי.
העבירו את הזחלים לכלי ביקר המכיל מים דה-יוניים.
החדירו densovirus רקומביננטי, שהונדס להקיד microRNA המדכא גנים של הזחלים המהווים את המטרה. דגרו.
הזחלים קולטים את הנגיף, אשר מגיע לאחר מכן למעי.
הנגיף שנבלע חוצה את אפיתל המעי ומתפשט לרקמות אחרות.
הנגיף חודר לתאי הזחלים באמצעות אנדוציטוזה ומשחרר את ה-DNA שלו אל הגרעין.
ה-DNA הוויראלי מייצר microRNAs.
בציטופלזמה, microRNA-ים אלו נקשרים למכלול השתיקה המושרה על ידי RNA.
הקומפלקס נקשר ומבקיע mRNA של זחלים המשלים למטרה, ובכך מונע את הביטוי ומוביל להשתקת גנים.
לאחר הדגירה, שטפו את הזחלים במים דה-יוניים כדי להסיר חלקי וירוס שלא נבלעו.
העבירו את הזחלים לצלחת חדשה עם מזון לצורך התאוששות.
הזחלילי יתוש שהודבקו בנגיף, עם השתקה של הגן המטרה, מוכנים ליישומים המשכיים.
שטפו 10 זחלים בשלב ה-instar הראשון .A. albopictus שטפו את הזחליים שלוש פעמים במים דה-יוניים. לאחר מכן, העבירו את הזחליים לכלי כימי (beaker) המכיל 95 מיליטר של מים דה-יוניים.
הוסיפו 5 mL ממלאי ה-rAaeDV, ודגרו את הזחלים למשך 24 שעות בטמפרטורה של 28 °C. להצלחת זיהום הזחלים, חיוני שהזחלים יהיו במגע עם חלקיקי הנגיף המדביקים למשך 24 עד 36 שעות כדי להבטיח שיעורי הדבקה גבוהים. לאחר הדגירה, שטפו את הזחלים שלוש פעמים במים דה-יוניים, ואז העבירו את הזחלים בחזרה לצלחות. האכילו את הזחלים באופן סדיר.