העברת גנים באמצעות בקטריופאג בחיידקי ספירוכטה

קחו תרבית של חיידקי ספירכטות שעברו שינוי גנטי. חיידקים אלו נושאים את הגן לעמידות לגנטימיצין.

הוסף תרחיף בקטריופאג לתרבית החיידקים.

הפאג'ים נושאים DNA פלסמידי המקודד לגן עמידות לקנמיצין.

דגרו את התערובת.

הבקטריופאג נצמד לפני השטח של החיידק ומזריק את ה-DNA אל תוך התא.

הפלסמיד משתכפל באופן עצמאי ועובר הלאה כאשר החיידקים מתחלקים.

ערבבו את התרבית שעברה אינקובציה עם מצע אגרוז נוזלי (molten agarose) המועשר באנטיביוטיקה gentamicin ו-kanamycin.

שפכו את התערובת אל תוך צלחת. המתינו להתמצקות ולאחר מכן דגרו.

תחת ברירה של אנטיביוטיקה כפולה, רק תאים הנושאים את שני סמני העמידות גדלים ויוצרים מושבות, בעוד ששאר התאים מתים.

בחר מושבה והעבר אותה לתרבית המכילה את שני האנטיביוטיקה.

דגרו כדי להקל על צמיחת החיידקים עם הפלסמיד שהועבר בטרנסדוקציה לצורך ניתוחים המשכיים.

שפכו את העלייה ותלו את המשקע ב-14.5 milliliters של BSK טרי. הוסיפו כמות שווה או קטנה מ-500 microliters של דגימת פאג שהושקעה באמצעות PEG לתרבית של השבט המקבל.

לאחר ערבוב יסודי, דגרו בטמפרטורה של 33 °C למשך 72 עד 96 שעות. בצעו סלקציה של הטרנסדוקטנטים באמצעות זריעה על מצע מוצק לאחר ערבוב עם פאג שהשקיעו ב-PEG, כפי שמתואר במאמר. בהתאם לרקע של השיבוב המקבל, ודאו שהמושבות מופיעות בתוך האגרוז בצלחות הסלקציה לאחר 10 עד 21 ימי דגירה.

בחר לפחות 5 עד 10 מושבות שגדלו על הצלחת בנוכחות שני האנטיביוטיקה, באמצעות פיפטת בורוסיליקט סטרילית באורך 5.75-inches עם פקק כותנה, והעבר אותן לתוך 1.5 milliliters של BSK עם האנטיביוטיקה המתאימה.