אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:36 דק׳ • August 31st, 2026
התחל עם תרחיף המכיל משקעים של אינטסומים של prototype foamy virus או PFV, אינטגראזות מונומריות, אוליגומרים של DNA ומצברי חלבונים.
אינטסומים של PFV הם טטראמרים של אינטגראזות ויראליות המקומפלקסות עם אוליגומרים סינתטיים המדמים DNA גנומי ויראלי.
הוסיפו תמיסת מלח לסספנסיה והדגירו על קרח. המלח מפחית את האינטראקציה האלקטרוסטטית בין האינטסומים, ובכך מאפשר למשקעים להתמס.
בצעו פיפוט עדין במרווחי זמן קבועים כדי לעודד את המסת האינטסום (intasome).
סבב במצנטריפוגה להשקעת המשקעים שנותרו ואסוף את העילאי המכיל אינטסומים ממיסים.
השתמש בעמודת כרומטוגרפיית סמך-הדרה (SEC) שעברה שיווי משקל מוקדם וממולאת בחרוזי אגרז קשורי-צלב, והעמס את supernatant על העמודה.
בשל גודלם הרב, אגרגטים של חלבונים ואינטסומים עוקפים את נקבי החרוזים ונשטפים מוקדם יותר.
אינטגראזים מונומריים ואוליגומרים קטנים יותר חודרים לנקבי החרוזיקים ונשטפים מאוחר יותר.
אספו את הפראקציות המוקדמות המכילות אינטזומים (intasomes) לצורך ניתוחים המשכיים.
הכינו שני קצות פיפט רחבים (wide-bore) על ידי הסרה של 2-4 מ"מ מקצה של טיפ של 20 µL באמצעות להב תער או סקלפל חדש על משטח נקי. הוציאו את צינור הדיאליזה מתוך תמיסת הדיאליזה. כדי למנוע דילול של דגימת האינטסום (intasome) על ידי תמיסת דיאליזה שעלולה להישאר בקצה הצינור ליד התפסן, השתמשו במיקרופיפט עם טיפ קטן כדי להסיר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים