קציר חלקיקי נגיף הפטיס E מתאי סרטן כבד אנושיים

התחל עם תרבית של תאי סרטן כבד אנושיים שעברו טרנספקציה של RNA של נגיף הדלקת כבד E (HEV) כדי לייצר חלקי נגיף.

חלק מה-HEVs רוכשים ממבנה של ממברנה אנדוזומלית מהמארח ויוצאים מהתא, בעוד שאחרים נשארים בתוך התא כ-HEVs לא מעטופים.

כדי לאסוף חלקי HEV חוץ-תאיים, אספו וסננו את עליון התרבית כדי להסיר פסדתיים תאיים.

יש לאחסן בטמפרטורה נמוכה במיוחד כדי לשמר את היכולת להדבקה.

כדי לאסוף חלקיקי HEV תוך-תאיים, שטפו את התאים עם בופר.

הוסיפו trypsin-EDTA כדי לנתק את התאים, ולאחר מכן הוסיפו מצע גידול כדי לעצור את הפעילות האנזימטית.

העבירו את התרחיף למבחנה וסובבו בצנטריפוגה.

שפכו את העלייה המכילה שאריות trypsin. תלו את המשקע והעבירו אותו למבחנה.

הקפיאו את התאים בחנקן נוזלי והפשירו אותם על קרח.

חזור על מחזורי ההקפאה וההפשרה כדי ל lysed את התאים ולשחרר את הווירוסים.

סנטריפוגה, אסוף את העל-נוזל המכיל את הווירוסים, ואחסן בטמפרטורה נמוכה מאוד.

ביום השישי, סננו את העלייה (supernatant) דרך רשת של 0.45 micrometer כדי להסיר שאריות תאים, ואחסנו את נגיף ההפטיס E שנוגזר מתרבית תאים חוץ-תאיית בטמפרטורה של ארבעה מעלות Celsius. לקציר חלקיקי נגיף ההפטיס E שנוגזרו מתרבית תאים תוך-תאיית, שטפו את התאים עם PBS ונתקו את התאים באמצעות 1.5 milliliters של 0.05% trypsin-EDTA בטמפרטורה של 37 מעלות Celsius. לאחר שהתאים נתקו, עצרו את התגובה ע