תכנות מחדש של תאי דם אנושיים לתאי גזע פלוריפוטנטיים מושריים באמצעות נגיף סנדאי

קח תרבית של תאים חד גרעיניים של דם היקפי אנושי (PBMCs).

הוסיפו נגיף Sendai המקודד לגורמי שעתוק של תכנות מחדש. כסו ואטמו את הפלטה.

בצע סבוב במצנטריפוגה כדי להגביר את המגע בין הווירוס לתאים, ולאחר מכן דגור.

בעקבות היתוך הווירוס, ה-RNA הויראלי מבטא גורמי שעתוק המפעילים גנים של פלוריפוטנציה תאית ומדכאים גנים ספציפיים לשושלת כדי להתחיל את התכנון מחדש (reprogramming).

במהלך שלב זה, תת-אוכלוסייה של PBMCs שעברו טרנסדוקציה הופכת לתאי גזע פלוריפוטנטיים מושריים (iPSCs) ומבטאת חלבוני היצמדות.

העבירו אותם לבאר מצופה במטריקס והסביבו את התאים לצמידה. החליפו את העלוי במצע גידול.

לאחר הדגירה, תאי iPSCs נצמדים למטריצה, בעוד ש-PBMCs שאינם נצמדים שעברו טרנסדוקציה נותרים תלויים.

העבירו את הסספנזיה לבאר מצופה וסבבו בצנטריפוגה. הוסיפו את המצע לבאר המקורית והדגרירו את שתיהן.

שאר תאי ה-PBMCs שעברו טרנסדוקציה מתחילים בתהליך התכנות מחדש, הופכים ל-iPSCs ונצמדים. שלב זה ממקסם את שימור התאים שעברו תכנות מחדש.

החליפו את המצע מדי יום כדי לתמוך בצמיחת ה-iPSC.

בפרוצדורה זו, העבירו את תאי הדם למבחנה קונית של 15 מיליליטר, וספרו אותם באמצעות המוציטומטר. לאחר מכן, הכינו 3 x 10⁵ תאים לטרנסדוקציה, וסובבו את התאים בצנטריפוגה ב-515 ×g למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן, השליכו את העליון באמצעות שאיבה, והשביו את התאים ב-0.5 millil