ניתוח הפנמה של נגיף השפעת באמצעות בדיקת חסימת סטראפטאווידין

התחילו עם מבחנות המכילות תאי אפיתל של ריאה אנושית.

הוסיפו נגיפי שפעת biotinylated והדגירו על קרח. הנגיפים נקשרים לפני השטח של התא ללא התמססות פנימה (internalization).

סבב במצנטרליפוגה כדי להפריד את התאים הקשורים לנגיף, הסר את העלייה (supernatant) ובצע השהיה מחדש (resuspend).

למבחנה של נקודת הזמן הראשונה, הוסף streptavidin לא מסומן, הנקשר לנגיפים הביוטיניליים ויוצר קומפלקסים.

הוסיפו סטראפטאבידין המסומן בפורופור, אשר אינו נקשר לקומפלקס הסטראפטאבידין-ביוטין של הנגיף. שטפו וקבעו את התאים.

דגרו את המבחנה של נקודת הזמן המאוחרת יותר בטמפרטורה גבוהה יותר, כדי לאפשר את הפנימה של הווירוס (internalization), ולאחר מכן החזירו לקרח.

הוסיפו streptavidin לא מסומן וחומר חוסם התפשטות פנימה (internalization-blocking agent), המונע ספיגה נגיפית נוספת, והדגירו. Streptavidin נקשר לנגיפים ביוטיניליים הקשוריים לפני השטח, ולאחר מכן שטפו.

קבע את התאים והוסף באפר המכיל דטרגנט כדי להחדיר אליו חומרים (permeabilize).

שטפו והוסיפו streptavidin המסומן בفلורופור, אשר חודר לתאים נקשר לביוטין.

נתחו את הדגימות באמצעות ציטומטריה של זרימה.

פלואורסצנציה גבוהה יותר בנקודת הזמן המאוחרת יותר מאשרת הפנמה נגיפית מוצלחת.

לאחר חזרה על השטיפה פעם נוספת, קררו את המבחנות על קרח למשך 10 דקות. לאחר שהמבחנות התקררו, צנטריפגו שוב והשתמשו ב-100 m