מכשיר מצופה סיליקון שהודפס בתלת מימד למודל זיהום בדרכי השתן הקשור לצנתר

קח צלחת מרובת בארות המכילה שתן אנושי סטרילי.

חסנו את בארות הבדיקה בחיידקים. בארות הבקרה מכילות שתן בלבד.

קחו מכשיר מצופה סיליקון המודפס בתלת מימד המחקה את פני השטח הפנימיים של הצנתר, שבו מתפתחים ביופילמים במהלך זיהומים בדרכי השתן הקשורים לצנתר.

הניחו אותו בבארות, אטמו את הצלחת ודגרו עליה.

חיידקים נצמדים למשטח המכשיר, מנצלים חומרים מזינים מהשתן ויוצרים ביופילמים.

שטפו את המכשיר עם מאגר כדי להסיר חיידקים קשורים באופן רופף.

הנח את המכשיר בצלחת מרובת בארות המכילה סגול קריסטל, המקיים אינטראקציה עם הביופילם כדי להכתים אותו.

שוטפים במים ומייבשים.

טבלו את המכשיר בצלחת מרובת בארות המכילה תמיסת חומצה כדי לשבש אינטראקציות צבע-ביופילם ולשחרר את הצבע לתמיסה.

מדוד את ספיגת התמיסות בכל באר באמצעות ספקטרופוטומטר.

ספיגה גבוהה יותר בבארות הבדיקה בהשוואה לבארות הבקרה מאשרת היווצרות ביופילם במכשיר, מה שמעיד על התאמתו למודל זיהום בדרכי השתן הקשור לצנתר.

כדי להתחיל, השג דגימת שתן אנושית מאוחדת. 135 מיקרוליטר של שתן אנושי איגום לכל באר בדיקה של צלחת של 96 בארות בהתאם לפריסה המיועדת.

חסנו כל באר בבדיקה ב-15 מיקרוליטר של תרבית חיידקים מנורמלת למשך הלילה כדי להשיג נפח סופי של 150 מיקרוליטר לבאר. שמור לפחות 100 מיקרוליטר מתרבית זו לשלבי אימות דילול סדרתי הבאים.

הכינו בארות בקרה שליליות על ידי הוספת 150 מיקרוליטר של שתן אנושי סטרילי לבארות ייעודיות.

כעת, הכנס את היתדות לבארות המתאימות להן. לחץ כלפי מטה על מכסה היתד עד שהוא יושב צמוד על הצלחת ואבטח אותו עם מכסה המיקרופלייט, והדבק אותו במידת הצורך.

לאחר מכן הנח את דגמי היתד באמבט פלסטיק אטום או בשקית המכילה גליל כחול לח למניעת אידוי. דגירה סטטית במשך 24 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.

לצורך אימות חיסון, יש למנות 180 מיקרוליטר של PBS לשורות 2 עד 6 של העמודה הראשונה של צלחת של 96 בארות לפני הוספת התרבית השמורה.

כעת, העבירו 20 מיקרוליטר מהבאר הראשונה לבאר השנייה, ערבבו בעדינות על ידי פיפטינג למעלה ולמטה. המשך בדילול סדרתי עד שהחיסון הראשוני מדולל לבאר הסופית.

לאחר מכן, צלח 10 כתמי מיקרוליטר מכל דילול על מדיה מוצקה מתאימה בשלוש עותקים. לאחר דגירה של לילה ב-37 מעלות צלזיוס, ספרו את המושבות מכל נקודה.

לכימות ביופילם, הסר את מודל היתד מהמיקרו-לוח והפוך אותו מתחת ללהבה או בתוך ארון בטיחות מיקרוביולוגי, כאשר יתדות פונות כלפי מעלה. השלך את המיקרו-פלטות המשומשות

העבירו את מכסה היתד למיקרו-פלטה טרייה המכילה 180 מיקרוליטר של PBS סטרילי כדי לשטוף תאים לא דבוקים.

לאחר מכן, בעבודה אספטית, הנח מתלה מבחנה מזכוכית סטרילית על הספסל והצמד את המתלה המותאם המחזיק את מכסה היתד.

בעזרת מיקרופיפטה, הכניסו 600 מיקרוליטר של PBS סטרילי לכל מבחנה. כעת, הכנס את מכסה היתד למתלה, וודא שהיתדות מיושרות עם המבחנות. הסר כל סרט חיטוי מהמכסה.

השתמש במלקחיים סטריליים כדי לדחוף כל יתד דרך המכסה לתוך המבחנות ישירות מתחת. לאחר מכן החליפו את מכסי המבחנה ומערבלו כל שפופרת למשך 60 שניות כדי לעקור תאים הקשורים לביופילם.

הסר 100 מיקרוליטר מכל צינור מערבולת ובצע דילולים סדרתיים ב-PBS סטרילי כפי שנעשה בעבר.

כדי להכתים את התאים בסגול קריסטל, פיפטה 180 מיקרוליטר של 0.1 אחוז משקל לנפח סגול קריסטל במים מזוקקים סטריליים לתוך 24 הבארות שנבדקו בצלחת של 96 בארות. הכנס את דגם היתד השטוף לבארות המתאימות ודגר בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות.

לאחר הצביעה, הסר את דגם היתד מהצלחת והשליך את הצלחת המשומשת. באמבטיה נקייה יש לשטוף את כל דגם היתד במי ברז זורמים בתסיסה עדינה.

לאחר 2 כביסות נוספות, הפוך את דגם היתד ותן לו להתייבש לחלוטין בטמפרטורת החדר. לאחר מכן הוסף 180 מיקרוליטר של 30% חומצה אצטית לצלחת חדשה של 96 בארות. הכנס את דגם היתד המיובש לבארות המתאימות.

לאחר השלמת הדגירה, הסר את דגם היתד מהמיקרופלייט. מדוד את הצפיפות האופטית של הבארות המוכתמות ב-540 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-פלטות או ספקטרופוטומטר.