טיהור של וקטורים אדנו-ויראליים המכילים גנום באמצעות צסיום כלוריד

התחל עם תאי יונקים שהודבקו באדנווירוס.

בצע מחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים כדי ללוות את התאים ולשחרר את הוויריונים.

סבב את הליזאט בצנטריפוגה כדי לשקיע את השאריות. אסוף את supernatant המכיל את החלקיקים הוויראליים.

הנח את העל-נוזל הווירוסלי על גבי מדרג של cesium chloride להפרדה מבוססת צפיפות.

אולטרה-צנטריפוגה כדי לאפשר לחלקיקי הנגיף לנדוד בהתאם לצפיפות הציפה שלהם.

ויריונים שלמים המכילים את הגנום האדנו-ויראלי המלא הם דחוסים יותר בשל ה-DNA הארוז ושוקעים לפס תחתוני, בעוד שקפסידים ריקים וקלים יותר ושאריות נותרים בשכבות העליונות.

הסיר את השכבות העליונות. אסוף את הפס התחתון של ה-virions המכילים גנום.

יש להשעות מחדש את הוויריונים בקיסריום כלוריד בעל צפיפות אחידה ולבצע סבב נוסף של אולטרה-צנטריפוגציה כדי לדייק את ההפרדה ולרכז את החלקיקים המלאים.

השליכו את השכבות העליונות והפיקו את הפס התחתון.

בצע דיאליזה לדגימה כדי להסיר את הצסיום כלוריד.

הווקטורים האדנו-ויראליים בעלי הטוהר הגבוה המכילים את הגנום מוכנים כעת ליישומים המשכיים.

כדי להכין את הליזט הוויראלי לטיהור במדרג צסיום כלוריד, בצעו הפשרה והקפאה של תרחיף התאי-נגיף ארבע פעמים. לאחר מכן, סבבו את הליזט הוויראלי בצנטריפוגה ב-500 ×g למשך שמונה דקות בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן, אספו את העלייה המכילה את האדנווירוס בעל הקיבולת הגבוהה. העבירו בזהירות ובאיטיות בעזרת פיפטה