אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:08 דק׳ • August 31st, 2026
התחילו עם מערכת ביו-ריאקטור המכילה פיגום של כבד חולדה שעבר דה-צלולריזציה ואוכלס מחדש בתאי כבד אנושיים.
הפיגום מתוחזק במערכת זרימה המזרימה מצע גידול לצורך אספקת חומרי הזנה.
מלאו מזרק בבפר containing וקטור של נגיף adeno-associated recombinant.
הווקטור נושא DNA משלים-עצמית (self-complementary DNA) עם קסטת טרנסגן המקודדת לדיווח פלואורסצנטי ול-RNA להשתקת גנים.
עצור את זרימת המדיום ונתק את צינור הכניסה.
הזריק את הווקטור דרך כלי הדם הראשי המספק דם לפיגום.
דגרו את הדגימה כדי לאפשר אינטראקציה בין הווקטור לתאים.
הווקטור חודר לתאי הכבד באמצעות אנדוציטוזה מתווכת רצפטורים.
לאחר הכניסה פנימה, הווקטור נמלט מהאנדוזום ומשחרר את ה-DNA העצמי-משלים שלו לתוך הגרעין.
DNA משלים-עצמית (Self-complementary DNA) מאפשר ביטוי ישיר של הגן הזר, המייצר חלבון פלואורסצנטי ו-RNA להשתקת גנים.
חזור בהדרגה לזרימת המדיום כדי לשחזר את הסירקולציה דרך הפיגום (scaffold).
מודל הכבד שעבר טרנסדוקציה מתאים כעת לאנליזות המשך.
כעת בצעו טרנסדוקציה למודל הכבד. ראשית, טענו למזרק 27 טריליון וקטורים ב-5 ml של PBS. ניתן להוסיף Phenol red בריכוז של 5 µg/ml.
לאחר מכן, נתקו את הכבד ממעגל המדיום והזריקו את הווקטורים למערכת. לאחר ההזרקה, דגרו את המערכת למשך שעה אחת ללא שאיבה. לאחר מכן, הגבירו את זרימה באופן הדרגתי כפי שתיארנו קודם לכן.
בהמשך, בעת דגירה של הכבד שעבר טרנסדוקציה במשך שישה ימים, החלף 50 מיליליטר של המצע מדי יומיים.