צמיחה נגיפית בתאי אפיתל של האף האנושי המגודלים בממשק אוויר-נוזל

התחל עם תאי אפיתל של רירית האף האנושית המכוסים בריר, אשר גודלו על גבי תומך transwell בתוך פלטה בעלת מספר בארות.

הצד הבזאלי של התרבית בא במגע עם מצע גידול, בעוד שהמשטח האפיקלי חשוף לאוויר, מה שמדמה את ממשק האוויר-נוזל (air-liquid interface) של חלל האף.

שטפו את התרבית עם בופר כדי להסיר את שכבת הריר.

הוסיפו קורונה-וירוס, התלוי במצע ללא סרום, לתרבית.

דגרו את הפלטה תוך כדי ניעור מדי פעם כדי להבטיח ספיחה ויראלית.

הסר את האינוקולום הוויראלי ושטוף עם בופר כדי להסיר נגיפים שאינם קשוריים.

הוצא את התבנית (insert) ומלא מחדש את הבאר במצע טרי.

דגרו את הפלטה כדי לאפשר הדבקה נגיפית.

הקורונה-וירוס נקשר לקולטן על פני התא, חודר פנימה באמצעות אנדוציטוזה, ומשחרר את הגנום שלו אל הציטופלזמה.

הגנום הוויראלי משתכפל ומייצר חלבונים, המרכיבים נגיפים חדשים.

וירוסים חדשים משתחררים אפיקלית, מתפשטים כדי להדביק תאים סמוכים, ומעצימים את הצמיחה הוויראלית.

גדלו והבדילו תרביות של ממשק אוויר-נוזל (ALI) של אפיתל האף בתוך transwells בעלי תא בסיסי ותא אפיקלי. הרחבו את תאי הסינו-נזל האנושיים המופרדים בתנאי טבילה (submerged), ולאחר מכן, הסירו את המצע מהתא האפיקלי כדי לאפשר את הבחנת התרביות בממשק אוויר-נוזל.

ביום שלפני ההדבקה, שטפו את תרביות ה-ALI בצורה אפיקלית עם תמיסת סליין המחוצנת בפוספט (phosphate-buffered saline), או PBS. לשם כך, ה