הכנת תרחיף מועשר בנגיף באמצעות סרימרטריפוגציה של סוכרוז במדרגות

התחילו עם מבחנה לאולטרה-צנטריפוגה המכילה מדרג סוכרוז.

הוסיפו בזהירות את העל-נוזל המכיל את הווירוס מעל השכבות.

בצעו סבב צנטריפוגה עם האצה והאטה מבוקרות כדי לשמור על הגרדיאנט, ובכך אפשרו לחלקיקים לשקוע לשכבה התואמת את הצפיפות הצפה שלהם במהלך הסיבוב.

חלבונים קלים יותר נותרים בשכבה העליונה. חלקיקי וירוס שלמים מרכזים את עצמם בין השכבות בעלות הצפיפות הנמוכה והגבוהה יותר, בעוד ששאריות תאיות כבדות יותר שוקעות בתחתית.

שפכו את השכבות העליונות, ואספו את מקטעי הסוכרוז האמצעיים המועשרים בנגיף אל תוך מבחנה נקייה.

הוסיפו באפר וערבבו את הדגימה מספר פעמים.

בשלב הבא, העבירו בזהירות את תרחיף הנגיפים בשכבה מעל כרית סוכרוז (sucrose cushion) בעלת צפיפות נמוכה במבחנה נקייה.

סבב את התרחיף בצנטריפוגה. חלקיקים ויראליים כבדים יותר שוקעים לתחתית, בעוד שהמזהמים הקלים יותר נותרים בעיקר בתרחיף.

שפכו את העלייה. נקו את הנוזל שנותר על ידי הפיכת המבחנה על גבי נייר סופג.

שחזר את משקע הנגיפים בתמיסת באפר.

התגובה המועשרת בנגיף מוכנה למחקרי המשך.

מלאו את מבחנות האולטרה-צנטריפוגה הקוניות בריכוזי סוכרוז שונים כדי ליצור שכבות של מדרג סוכרוז.

הוסיפו בזהירות את העל-נוזל המכיל את הנגיף לגרדיאנט הסוכרוז. כדי לעבד את כל נפח העל-נוזל הנגיפי, 100 mL, השתמשו בשישה מבחנות אולטרסנטריפוגה בכל סבב סיבוב. לאחר מכן, איזנו את מבחנות האולטרסנטריפוגה