טיהור חלקיקי נגיף רקומביננטיים מתאי כליה אנושיים שעברו טרנספקציה

התחל עם ליזט תאים המכיל DNA תאי המקובץ יחד עם חלבונים תאיים וחלקיקים ויראליים.

הוסיפו יוני מגנזיום, ולאחריהם נוקלאז, כדי להפעיל פירוק אנזימטי של DNA תאי ולפרק אגריגטים של DNA–חלבון.

סבבו בצנטריפוגה כדי להפריד את השאריות ואספו את העלון (supernatant) המכיל את חלקיקי הווירוס.

שכב את supernatant על גבי מדרג iodixanol לא רציף, שבו הריכוזים עולים מלמעלה למטה, ולאחר מכן מלא את המבחנה בבופר.

אולטרא-צנטריפוגה להפרדת הרכיבים על בסיס צפיפות. חלקיקי הנגיף מצטברים בממשק שבין השכבות בעלות הצפיפות הגבוהה והבינונית.

החדירו מחט בממשק זה ואספו את החלקיקים הויראליים אל תוך מבחנה.

הוסף בופר המכיל רכיבים מייצבים, אשר מונעים אגרגציה של חלקי הווירוס.

לאחר מכן, העבירו את התמיסה למבחנה עם מסנן ממברנה.

סב במצנטריפוגה כדי לרכז את החלקיקים הוויראליים מעל המסנן.

הוסיפו את הבאפר המועשר בחומר מייצב וסבבו שוב במערך צנטריפוגה כדי להפיק חלקי וירוס מנוקים.

כדי לקצור את התאים שעברו טרנספקציה, יש לשחרר ולהשעות את התאים באמצעות מצע גידול על ידי פיפוט למעלה ולמטה. לאחר מכן, העבירו את תרחילי התאים למבחנות סטריליות של 50 מיליטר. סבבו את התאים בצנטריפוגה ב-50 ×g למשך חמש דקות.

לאחר מכן, הוסיפו חמישה מיליטר של PBS לכל מבחנה והחזירה לתליה את משקעי התאים לפני איחוד כל התליות במבחנה אחת של 50 מיליטר. לאחר סבב של התאים ב-50 times g למשך ח